普氏立克次体(Rickettsia prowazekii)是流行性斑疹伤寒(epidemic typhus)的病原体。采用立克次体全菌抗原做间接免疫荧光(IFA)是最常用的实验室血清学诊断斑疹伤寒方法,但是该IFA存在不同种属立克次体菌体之间的抗体交叉反应,也影响该血清学诊断的可靠性。因此,发现普氏立克次体特异性蛋白抗原代替全菌抗原做流行性斑疹伤寒血清学诊断很有必要。本研究选择8个普氏立克次体主要蛋白抗原(EF-Ts、EF-Tu、FtsZ、 GroEL、Omp、Sca5、TolC、Rp828)作为流行性斑疹伤寒血清学诊断候选抗原。采用9对引物(其中一个基因分为2段扩增)做PCR,从普氏立克次体全基因组扩增9个目的基因片段。将扩增的9个基因片段与原核表达质粒pET-32a(+)重组,再将重组质粒分别转化大肠埃希氏菌；在IPTG的诱导下9个转化菌分别表达目的重组蛋白。采用镍离子亲和层析法(Ni-NTA)从转化菌中纯化这9个重组蛋白。采用普氏立克次体、莫氏立克次体、立氏立克次体、黑龙江立克次体、恙虫病东方体、贝氏柯克斯体感染小鼠血清与9个重组蛋白做免疫印迹,结果显示FtsZ、GroEL、EF-Ts、Rp828等4个蛋白特异性最好,仅与普氏立克次体感染血清反应。将9个重组蛋白点制一张微型蛋白芯片,再用立克次体感染血清分析蛋白芯片,结果显示FtsZ、GroEL、Rp828、Sca5-1等4个蛋白呈现良好的血清学特异性,其仅与普氏立克次体和莫氏立克次体感染小鼠血清反应阳性。我们研究结果证明FtsZ、Rp828、GroEL重组蛋白为斑疹伤寒立克次体的特异性抗原,其与Omp、EF-Ts、Sca5-1重组蛋白结合做血清学分析可显著改善斑疹伤寒血清学诊断的特异性和敏感性。图12幅,表3个,参考文献46篇。