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目的:植物内生菌在与宿主植物寄生过程中可以产生与宿主相同或相似的药理活性的成分。本课题旨在观察甘草内生菌有效菌株与甘草水煎液、总黄酮、总皂苷抗炎作用差异,为研究甘草内生菌与其宿主抗炎作用的相关性及发现甘草新药源提供依据。方法:1.通过结合MTT法检测对不同浓度LPS刺激小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)的毒性大小和采用Griess法检测不同浓度LPS刺激RAW 264.7细胞上清液中NO的含量,筛选出最佳炎症模型的LPS浓度,为接下来体外抗炎实验做铺垫。2.采用“Z”字划线法和五点法分别在NA、PDA固体培养基上对栽培甘草内生细菌和栽培甘草内生真菌分别进行分离和纯化,直到得到纯净的菌种,标记为栽培甘草各自的菌株。栽培甘草内生细菌为JTZB001、JTZB002、JTZB003…,栽培甘草内生真菌为JTZF001、JTZF002、JTZF003…。进行栽培甘草内生菌发酵液与宿主水煎液、总黄酮、总皂苷体对LPS致RAW 264.7分泌炎症因子NO、TNF-α、IL-6影响的实验研究。3.采用“Z”字划线法和五点法分别在NA、PDA固体培养基上对野生甘草内生细菌和野生甘草内生真菌分别进行分离和纯化,直到得到纯净的菌种,标记为野生甘草各自的菌株。其中野生甘草内生细菌为JTYB001、JTYB002、JTYB003…,野生甘草内生真菌为JTYF001,JTYF002,JTYF003…。进行野生甘草内生菌发酵液与宿主水煎液、总黄酮、总皂苷体对LPS致RAW 264.7分泌炎症因子NO、TNF-α、IL-6影响的实验研究。4.通过甘草内生菌发酵液与宿主水煎液、总黄酮、总皂苷对肺炎小鼠血清中的TNF-α、IL-6的含量影响,筛选出体内实验中最终与甘草有效成分相近药效的抗炎作用的有效菌株。结果:1.体外实验中,确定RAW 264.7炎症模型最佳造模所需的LPS浓度为10μg/mL。2.从栽培甘草中分离出了77株内生菌,其中内生细菌63株,分别为JTZB001、JTZB002、JTZB003…JTZB063,内生真菌14株JTZF001、JTZF002、JTZF003…JTYF014。与栽培甘草水煎液、栽培甘草总黄酮、栽培甘草总皂苷比较,ZB006和ZB016的抑制作用较强(P<0.05);与栽培甘草水煎液相比,栽培甘草总黄酮组抑制TNF-α的作用强,且抑制强度高于栽培甘草内生菌各有效菌株(P<0.05);与栽培甘草总黄酮组相比,其成倍的高于各有效菌株的抑制作用(P<0.05);宿主组的抑制作用普遍高于有效菌株组(P<0.05)。3.从野生甘草中共分离出了63株内生菌,其中内生细菌31株,分别为JTYB001、JTYB002、JTYB003…JTYB031,内生真菌32株,分别为JTYF001、JTYF002、JTYF003…JTYF032。与野生甘草水煎液组、野生甘草总黄酮组、野生甘草总皂苷组相比,JTYF027与之无差异,表明其抑制分泌作用无差异;JTYB018的TNF-α分泌量与野生甘草总皂苷比,强于皂苷组(P<0.05);JTYB018的NO和IL-6的分泌与野生甘草水煎液组、野生甘草总黄酮组、野生甘草总皂苷组相比没有差异,即抗炎作用与之相近。4.体内抗炎即肺炎小鼠实验中,测得血清中炎症因子含量栽培甘草水煎液相比,JTZB014和JTYB018组分泌的IL-6与之的差异有统计学意义(P<0.05),JTZB006、JTZB016、JTZB018、ZB062与之无差异;TNF-α的分泌量有效菌株组与宿主组无差异。结论:1.栽培甘草内生菌有效菌株及其宿主水煎液、总黄酮、总皂苷对LPS致RAW264.7分泌炎症因子的影响:各组均能抑制RAW 264.7炎症因子NO、TNF-α、IL-6的分泌,综合比较JTZB006、JTZB014、JTZB016、JTZB018、JTZB062的作用均弱于宿主各组,但有效菌株中ZB006、ZB016作用相对较强。2.野生甘草内生菌有效菌株及其宿主水煎液、总黄酮、总皂苷对LPS致RAW 264.7分泌炎症因子影响:各组均能抑制RAW 264.7炎症因子NO、TNF-α、IL-6的分泌,综合比较JTYB018、JTYF027的作用与宿主各组相似。3.野生与栽培甘草内生菌有效菌株及其宿主水煎液、总黄酮、总皂苷对肺炎小鼠抑制RAW 264.7分泌炎症因子的影响:各组均能抑制RAW 264.7炎症因子TNF-α、IL-6的分泌,综合比较,有效菌株各组作用弱于宿主组,但有效菌株中JTZB006、JTZB016、JTZB018、ZB062抗炎作用相对较强。