聚苹果酸(poly malic acid),简称PMLA,是一种聚酯类高分子聚合物,是一种具有良好的生物相容性、生物可降解性及生物可吸收性的聚合物,是潜在的食品包装材料,可作为药物载体、生物医学材料、吸水材料、化妆产品及微生物DNA聚合酶的抑制剂等,具有广泛的应用前景。本文以聚苹果酸高产菌株Aureobasidium pullulans CGMCC3337为研究对象,对其发酵培养基和培养条件进行了优化,本论文实验结果如下。氨基酸对聚苹果酸合成的影响及发酵培养基的优化为了研究培养基中添加氨基酸对聚苹果酸分子量的影响,利用摇床实验进行筛选,实验结果发现培养基中添加天冬氨酸、亮氨酸、缬氨酸以及苏氨酸时,菌体生长较好,且聚苹果酸产量及分子量均较高。经过正交实验,以聚苹果酸及其分子量作为评价标准,对聚苹果酸生产菌出芽短梗霉A.pullulans CGMCC3337的发酵培养基进行了优化。结果显示,经优化后,摇瓶培养的聚苹果酸产量及分子量比培养基优化之前分别提高了 40.92%和 45.20%。5 L发酵罐培养条件优化5 L发酵罐培养实验发现,发酵温度、搅拌转速及通风量对菌体的生长、聚苹果酸产量及其分子量都有较大影响。将整个发酵过程分为发酵前期、对数生长期及稳定期三个阶段,针对不同阶段对发酵条件进行调控。最终确定5 L罐发酵条件为,恒定转速400 r/min,恒定1:1.2通风比,在0-24 h调节发酵温度为30℃,24 h后调节发酵温度为25℃。在最佳的发酵条件下,发酵至144 h聚苹果酸产量及分子量分别达到44.9 g/L 和 8512 Da。ATP合成酶α亚基和ATP合成酶β亚基初步研究分别对ATP合成酶α亚基及ATP合成酶β亚基进行了基因水平的初步分析,并对ATP合成酶α亚基及ATP合成酶β亚基蛋白三维立体结构进行了预测。上述结论为出芽短梗霉定向改造提供了理论和技术支持,对以后构建基因工程菌具有一定的指导意义。