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尾加压素Ⅱ(Urotensin Ⅱ,UⅡ)最初从鱼类尾部神经分泌系统(Caudal Nuerosecretory System,CNSS)中分离得到,并被认为具有促平滑肌收缩和调节渗透压的作用。随着上世纪末UⅡ及其受体UT在哺乳类中的发现,UⅡ/UT在一些常见疾病中的作用引起了人们广泛的关注,然而对其在鱼类中的作用仍知之甚少。
本研究利用RT—PCR和RACE技术,从斜带石斑鱼中克隆并鉴定了UⅡ及其受体UT全长cDNA序列。其中UⅡcDNA全长966bp,5’非编码区长57bp,开放读码框(open reading frame,ORF)387bp,3’非编码区长519bp。由cDNA全长推导出的UⅡ前体由129个氨基酸序列组成,其中包含21个氨基酸的信号肽,96个氨基酸的前肽及12个氨基酸的成熟肽。成熟肽中包含保守的六肽环序列—Cys—Phe—Trp—Lys—Tyr—Cys—。UTcDNA全长1461bp,其中包括84bp的5’端非编码区,1071bp的ORF,309bp的3’非编码区。1071bp的ORF共编码357个氨基酸,含7个跨膜区,属于七次跨膜的G蛋白受体家族。同源性分析发现斜带石斑鱼UⅡ与欧洲川鲽(Platichthys flesus)的同源性很高,达到87%,与哺乳类的同源性则较低,仅为26%,而UT与斑马鱼同源性最高,达到88%,而与川鲽只有52%。
采用Real—timePCR对UⅡ及UT在斜带石斑鱼不同组织及胚胎发育时期的表达量进行了研究。UⅡ及UT在所有被检测的13个组织中均有表达,两者在CNSS和性腺都有很高的表达量,且在中枢神经系统中,下丘脑中的表达量均高于其他脑部各区,另外,中枢组织的表达量明显高于外周组织。本研究首次在鱼类不同胚胎发育时期检测了UⅡ/UT的表达量,除了UⅡ在多细胞期和囊胚期没有表达外,UⅡ/UT在检测的其它时期中均有表达,且在心脏彤成期,两者的表达量显著地高于其它时期。
本文通过腹腔注射UⅡ实验初步探讨了UⅡ/UT系统在斜带石斑鱼摄食调控中的分子机理。研究发现注射3小时后,与对照组相比高剂量(1000ng/g)和中剂量(100ng/g)的UⅡ分别显著和极显著地抑制了下丘脑中神经肽Y(NueropeptideY,NPY)及开胃素(orexin)的mRNA表达,而高、中、低剂量对下丘脑中UT受体的mRNA表达均没有影响。