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猪流感(Swine Influenza,SI)的病原是猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV),为猪的一种常患病。该病特点为传播速度快、发病率高,对仔猪特别是免疫力较弱的仔猪的致死率较高。虽然SIV感染一般不会导致猪的死亡,但由于其具有发病率高、导致免疫力下降、伴随或继发感染其他疾病甚至可能会传染给人类等特点,因此对SIV分子致病机制的研究日趋迫切。反向遗传操作技术广泛用于流感病毒分子致病机理的研究,本研究以实验室前期分离到的古典H1N1亚型SIV(A/Swine/Guangdong/1/2011(H1N1))为实验材料,成功拯救出病毒,血凝检测结果表明病毒具有血凝活性。为探究古典H1N1亚型SIV拯救株与野生株的生物学特性的异同,分别在MDCK细胞上进行了相关检测。结果表明:拯救株与野生株在同一时间点细胞病变(CPE)一致;血凝效价均为26;相同条件下在同一时间点空斑形态大小一致;差异显著性分析结果表明生长曲线差异不显著;序列分析表明拯救株与野生株序列一致。以上结果表明拯救株与野生株的生物学特性一致。禽源H1N1亚型SIV在我国猪群中广泛流行,造成了重大经济损失。本研究以一株禽源H1N1亚型SIV(A/Swine/Tianjin/6/2012(H1N1))为实验材料,利用RT-PCR技术成功扩增出病毒八片段后,胶回收纯化后连接PBD后共转染293T细胞,获得流感病毒拯救株,血凝试验检测病毒具有血凝活性,表明病毒拯救成功。PB2 627位氨基酸位点是流感病毒重要的毒力分子标记,能够影响人流感病毒和禽流感病毒在哺乳动物体内的复制,但其对SIV的复制有何影响还不是很清楚。本研究在成功建立的古典H1N1亚型SIV的反向遗传操作技术平台的基础上,利用点突变的技术将该位点的赖氨酸(K)突变为谷氨酸(E),分别在细胞和小鼠上对其复制能力进行研究。结果表明,相同情况下,突变株(627E)与拯救株(627K)相比,CPE程度较小;空斑形态明显减小;生长曲线在24h、36h、48h时差异极其显著(P<0.001),60h、72h时差异非常显著(P<0.01)。小鼠试验结果表明,突变株(627E)对小鼠的致病性较弱,不会导致小鼠体重下降,而拯救株在接种第5d时体重下降,第8d出现死亡,至第10d体重逐渐恢复,第13d恢复至正常增长水平。取第3d、5d肺脏组织测定病毒滴度,差异性分析结果表明差异极其显著;肺脏病理切片结果表明拯救株炎性细胞灶性浸润,可见多个浸润灶,部分肺泡壁增粗,而突变株仅表现为局部炎性细胞灶病变,表明突变株与拯救株对小鼠的致病性较低。以古典H1N1亚型SIV为实验材料,将PB2 627由K突变为E后,在体外和体内探究其生物学特性的结果均表明,突变后的毒株的复制能力降低。该结论不仅证实了流感病毒PB2 627位氨基酸为一种重要的毒力分子标记,同时还为进一步阐明其致病机制提供了条件。