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HMGB1可促进多种细胞的增殖、迁移、分化以及细胞骨架重建和伤口愈合,因此被归为一类新的具有细胞趋化作用的组织修复信号分子。人体内的MSC是无组织特异性的组织修复启动细胞,多种趋化因子和组织损伤信号分子可以动员MSC,并在特定条件下诱导其分化为构成结缔组织的细胞。我们推测HMGB1很可能会影响MSC的迁移、增殖和分化等生物学特性。因此,本研究观察了HMGB1对MSC表型、增殖、迁移,以及向成骨、成软骨和成脂肪分化性能的影响及其相关机制。 我们通过RT-PCR方法扩增出人HMGB1的全长编码基因,克隆于原核表达载体pET-24a-d(+),从而构建了HMGB1的原核表达载体;经IPTG诱导表达,通过亲和层析方法纯化得到了HMGB1融合蛋白。该蛋白在体外能够诱导大鼠血管平滑肌细胞的迁移,证明具有生物学活性。我们从人骨髓中分离并培养了MSC,鉴定了其免疫表型和多向分化潜能。RT-PCR方法证实MSC表达HMGB1的受体RAGE和TLR-4。在此基础上较系统研究了HMGB1对MSC生物学特性的影响。 1.HMGB1对MSC免疫表型的影响。25ng/ml的HMGB1作用2周后,MSC的免疫表型CD29、CD166、CD73、HLA-DR、CD80和CD86的表达均未发生明显变化,提示此浓度的HMGB1不影响其免疫表型。 2.HMGB1对MSC向成骨细胞分化特性的影响。HMGB1可提高MSC的ALP活性,且上调向成骨细胞分化的标志基因和转录因子(OPN、OCN、ALP、runx2)的表达。但并不能体外诱导MSC形成骨结节以及随后的矿化。因此,HMGB1虽然能促进骨髓MSC向成骨细胞分化,但不能诱导MSC分化为成熟的骨细胞。