目的:蜂胶是蜜蜂从植物的幼芽及树干上采集的树脂,并混入其上颚腺分泌物、蜂腊和少量花粉加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物。据报道世界各地在蜂胶中共鉴定出300多种成分,其中很多单成分具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤以及提高免疫功能的作用。在民间用于治疗各种疾病,如,心血管疾病、血液系统疾病、牙齿疾病,皮肤病和癌症,提高免疫力,治疗消化道溃疡、保护肝脏等。研究表明蜂胶对体外培养的多种癌细胞有杀伤作用,对小鼠移植的肝肿瘤、S180肉瘤、腹水瘤细胞等体内肿瘤有抑制作用。蜂胶又是一种天然的免疫强化剂,对肿瘤细胞有选择性的杀伤效应,而对正常细胞无影响或伤害很小。　　 此项研究的目的是为了探讨蜂胶体外诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及对p53、Bcl-2表达的影响。　　 方法:　　 1.四甲基偶氮唑盐比色分析法(MTT)测定蜂胶对Hep-2细胞存活率的影响当细胞在对数生长期,加入不同浓度的蜂胶,分别作用24、48、72h后,加入MTT,4 h后倾去上清液,加入DMSO充分溶解形成的结晶,用酶标仪测OD值(570nm),并计算抑制率。　　 2.流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期收集对照组和不同浓度蜂胶作用24 h后的细胞,以及80μg/ml蜂胶作用不同时间(24、48及72h)的细胞,上机进行细胞凋亡分析和细胞周期分析。　　 3.透射电镜观察细胞超微结构蜂胶作用于Hep-2细胞48h后,各组收获1×107个细胞样品,洗涤,2％戊二醛和1％四氧化锇双固定,常规包埋、聚合、切片,醋酸双氧铀、铅染液染色。透射电镜下观察,照相。　　 4.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)p53和Bcl-2 mRNA在6孔细胞培养板上培养Hep-2细胞,80μg/ml蜂胶作用4、8、12、16、20h后提取RNA,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析。　　 5.Western blot测p53、Bcl-2蛋白表达在6孔细胞培养板上培养Hep-2细胞,80μg/ml蜂胶作用4、8、12、16、20h后,提取蛋白,SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离蛋白质,转膜(湿转),分别加p53和Bcl-2单抗,再加入羊抗兔IgG-HRp,显色反应。　　 结果:　　 1.MTT法测得,蜂胶160μg/ml作用72h对细胞抑制率是76.4％,低浓度(20μg/ml)作用24h对细胞抑制率是10.4％,抑制率随蜂胶剂量增大、作用时间延长而增大,存在剂量、时间依赖关系(p<0.05)。　　 2.流式细胞技术检测结果显示,不同剂量蜂胶作用24h后均出现不同程度的AP峰,低浓度(20μg/ml)作用24h后凋亡率为5.11％,160μg/ml24h后细胞凋亡百分率达34.92±1.72％,各浓度组与阴性对照组比较、各浓度组之间凋亡百分率差异有显著性(P<0.05),具有浓度依赖关系。80μg/ml蜂胶作用24、48、72h,细胞凋亡率分别为27.25％、38.15％、45.44％,各时间组之间抑制率差异有显著性(P<0.05),具有时间依赖关系。　　 3.透射电镜可见,蜂胶处理后胞质浓缩,核畸形,染色质高度凝集,边集,并有典型的凋亡细胞和凋亡小体。　　 4.RT-PCR检测结果显示,Hep-2细胞株经80μg/ml蜂胶处理后,p53/β2比值为1.9～2.0,p53mRNA在各个时间段无明显变化(p>0.05),而Bcl-2mRNA在蜂胶作用后逐渐减少,Bcl/β2比值由4h的1.4逐渐减少到20h的0.9(p<0.05)。　　 5.Westem blot检测结果 Hep-2细胞株经80μg/ml蜂胶处理后,4h开始其P53蛋白表达逐渐增多,p53/hsp70比值由4h的1.3逐渐增至2.3(p<0.05),而Bcl-2蛋白表达逐渐减少,Bcl-2/hsp70比值由4h的1.2逐渐减少为0.7((p<0.05)。　　 结论:　　 1.蜂胶乙醇提取物能够体外抑制喉癌细胞hep-2的生长,诱导喉癌细胞凋亡,抑制率、凋亡率有时间、剂量依赖关系,对细胞周期有一定的影响,G0/G1细胞明显增多,G2/M期细胞减少,非特异性阻滞细胞周期的全过程,形态学观察可见典型的凋亡细胞及凋亡小体。　　 2.蜂胶不引起p53mRNA的增加,但能够使p53蛋白表达增加；蜂胶作用后Bcl-2mRNA的减少,Bcl-2蛋白表达下调,促进细胞凋亡。