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目的探讨Beclin1在口腔鳞癌癌变过程中的表达与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR),微管相关蛋白 1 轻链 3B(Microtubule associated protein 1 light chain 3B,MAP1LC3B),B 淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,bcl-2),生存蛋白survivin及促凋亡蛋白bax的相关性及临床意义;探讨Beclin1对口腔鳞癌细胞生物学特性及对顺铂敏感性的作用及机制。方法采用免疫组化SP法检测口腔鳞癌组织(60例),口腔黏膜异常增生(48例),正常口腔黏膜(60 例)Beclin1、mTOR、MAP1LC3B、bcl-2、survivin、bax的表达,分析Beclin1表达与自噬、凋亡相关蛋白及口腔癌临床病理特征的相关性。采用siRNA干扰技术沉默口腔鳞癌细胞中Beclin1的表达,通过透射电镜、real-time PCR、western blot、CCK-8、克隆形成实验、细胞周期检测、划痕实验、AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测等技术观察Beclin1对口腔鳞癌细胞自噬、生物学特性(包括增殖、迁移、侵袭、凋亡等)的作用;并观察Beclin1基因沉默后口腔鳞癌细胞对顺铂敏感性的影响。所得数据采用SPSS19.0统计学软件进行分析,计数资料两样本率的比较采用χ2检验,组间样本均数的比较采用单因素方差分析,p<0.05为差异有统计学意义。结果1.Beclin1在正常口腔黏膜中呈较高水平表达(表达阳性率为75%),口腔鳞癌和异常增生组织中表达水平下降(65%、54.2%),异常增生与正常口腔黏膜表达相比差异有统计学意义(p<0.05)。mTOR在鳞癌和异常增生组织中均呈高水平表达(75%;66.7%),显著高于正常口腔黏膜(26.7%;p<0.05)。MAP1LC3B在正常口腔黏膜呈高水平表达(78.3%),异常增生组织中表达阳性率显著性降低(27.1%),鳞癌中表达呈降低趋势(58.3%),组间差异均有统计学意义(p<0.05)。Beclin1、mTOR、MAP1LC3B在癌中央区的表达均显著高于癌边缘区,三者的表达均与颈部淋巴结转移、临床TNM分期相关(p<0.05),癌浸润前沿组织中Beclin1、MAP1LC3B的表达在有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组(p<0.05)。此外,Beclin1,MAPlLC3B的表达还与患者吸烟史有相关性。2.bcl-2、survivin在口腔鳞癌中的表达(70%;73.33%)均显著高于异常增生和正常黏膜(p<0.05);bax在异常增生中呈高水平表达(77.08%),显著高于鳞癌及正常口腔黏膜(p<0.05)。bcl-2、survivin及bax三者表达均与原发肿瘤的大小和颈部淋巴结转移相关(p<0.05)。鳞癌中Beclin1的表达与bcl-2、survivin、bax 均有相关性(p<0.05;相关系数 r 分别为 0.421,0.367,0.542);在异常增生中Beclin1的表达与survivin相关(p<0.05;r=0.613)。3.Beclin1基因沉默后,口腔鳞癌细胞的自噬体明显减少,细胞增殖能力增强,S+G2/M期细胞比例显著增加;细胞的迁移和侵袭能力增强,细胞凋亡被抑制,Beclin1、MAP1LC3B的蛋白表达显著降低,mTOR变化未见显著性变化;bcl-2和survivin的表达显著性升高,bax未见显著性改变。4.Beclin1基因沉默后,顺铂致口腔鳞癌细胞的半数致死量从0.07mg/ml降至0.03mg/ml,口腔鳞癌细胞的死亡率显著增高,多药耐药蛋白1(MDR1)的表达显著降低。结论1.自噬相关蛋白Beclin1、mTOR及MAP1LC3B与凋亡相关蛋白bcl-2、survivin、bax共同参与口腔黏膜癌变过程,并与肿瘤的侵袭转移相关。2.基因沉默技术表明:Beclin1基因可能通过抑制癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进癌细胞的凋亡等发挥抑癌作用;降低Beclin1的表达能提高口腔鳞癌细胞对顺铂的敏感性,为增敏化疗药物的疗效奠定理论基础。