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目的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)是一类参与多种生物学效应的核受体,是研究的最广泛的一种,PPARγ除和脂质代谢、氧化还原状态、炎症、心血管疾病、糖尿病、肥胖等一系列生理过程密切相关外,还对细胞的生长、分化甚至凋亡有重要的影响。PPARγ属配体依赖的核转录因子,其配体包括天然配体:15脱氧-前列腺素J2(15d-PGJ2)、亚油酸、脂肪酸、氧化型低密度脂蛋白衍生物等,以及合成配体:抗糖尿病药物噻唑烷二酮类(TZDs)等。研究发现,其被配体激活后,在转录水平可促进多种细胞发生凋亡。半胱氨酸基天冬氨酸基-特异性蛋白酶(caspase蛋白酶)家族在细胞凋亡分子机制网络中居中心地位,其中caspase-3在蛋白酶级联切割凋亡过程中处于核心位置,被认为是凋亡的最终执行者,有“杀手蛋白”之称。本研究目的是分析不同浓度PPARγ配体对JEG-3细胞中caspase-3表达的影响,探讨PPARγ配体诱导JEG-3细胞凋亡的作用。方法JEG-3细胞系的培养:JEG-3细胞生长在含10%胎牛血清、青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml的FD(F12:DMEM=1∶1)培液中,待培养液变黄后换液,按1∶2传代。取对数生长期JEG-3细胞进行实验。实验分组对照组:不加15-d-PGJ2,进行常规的细胞培养和传代。处理组:接种细胞24h进入对数生长期后,一部分细胞加入六孔板中,把预先处理好的盖玻片置于六孔板内,待细胞爬满80%后,分别在培养液中加入10μmol/l的15-d-PGJ2,24小时后免疫荧光实验应用。另一部分加入(0.1,1,10μmol/l)的15-d-PGJ2,24小时将其收集离心后,装入EP管,以备Western Blot试验应用。结果免疫荧光实验:荧光显微镜下观察到的绿色荧光信号即为caspase-3免疫反应阳性信号。结果显示,绿色荧光信号主要定位在细胞浆中,提示caspase-3主要在细胞浆内表达。不经15-d-PGJ2处理的JEG-3细胞(0μmol/l)中表现为细胞浆内存在散在的绿色荧光信号,信号强度微弱,提示其中caspase-3仅有微弱的表达;而经15-d-PGJ2(10μmol/l)处理24h后的JEG-3细胞,虽细胞外观未见明显变化,但细胞浆内绿色荧光信号密集,并呈明显的亮绿色荧光信号,信号强度强,提示经15-d-PGJ2处理后的细胞中caspase-3表达水平明显升高。Westernblot技术:结果表明,正常对照组即JEG-3细胞不经15-d-PGJ2处理时(0μmol/l),条带相对表达量为0.23±0.06,提示细胞内caspase-3表达量较少;而经15-d-PGJ2处理后的细胞组条带相对表达量较多,提示经15-d-PGJ2处理后的JEG-3细胞内caspase-3表达量增加。结果还显示经15-d-PGJ2(0.1,1,10μmol/l)处理后,随着15-d-PGJ2浓度增加,条带相对表达量逐渐增加,分别为0.36±0.03、0.53±0.06、0.71±0.04。其中经0.1μmol/l 15-d-PGJ2处理后的JEG-3细胞的caspase-3表达量与对照组相比,有明显统计学差异(P＜0.05),而浓度为1.0和10μmol/l时,与对照组相比,有显著统计学差异(P＜0.01)。提示经不同浓度15-d-PGJ2处理后的JEG-3细胞内caspase-3表达量显著增加,且随15-d-PGJ2浓度的增加,JEG-3细胞内caspase-3表达量也增加,二者具有剂量依赖关系。结论(1)JEG-3细胞中存在caspase-3的表达。(2)PPARγ配体15-d-PGJ2可诱导JEG-3细胞中caspase-3表达增加。(3)随15-d-PGJ2浓度的增加,JEG-3细胞中caspase-3表达,二者具有剂量依赖关系,推测PPARγ配体可诱导JEG-3细胞发生凋亡。