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近年来羊胎盘提取液的研究引起了广大学者浓厚的兴趣,但这些研究只是集中在羊胎盘提取液的功能和应用方面。羊胎盘中含有的生物活性组分非常丰富,羊胎盘提取液中究竟哪些成分在免疫调节中起主导作用及如何从中分离纯化出单一活性组分等方面的研究一直未见报道。为此,我们开展本课题的研究,主要研究内容和结果如下:1.羊胎盘免疫调节活性因子(SPIF-Ⅰ)的分离与纯化将本实验室通过匀浆、冻融、超虑等步骤制备的分子量小于5000道尔顿的羊胎盘提取液,首先以20mg/ml浓度上样于Sephadex G-50(柱高100cm,直径1 cm)凝胶柱层析,pH7.4浓度为0.01mol/L的Tris-HCl缓冲液以0.5ml/min流速进行洗脱。结果得到洗脱峰A和B,反相HPLC检测分析发现洗脱峰B含组分较少,只有两个主要成分峰,便于进一步分离。多次重复此步并将洗脱峰B收集,冻干,再经Sephadex G-25凝胶柱(柱高60 cm,直径1 cm)层析,上样浓度、缓冲液的浓度、pH以及洗脱流速均同样于Sephadex G-50凝胶层析.结果得到洗脱峰C和D,反相HPLC检测分析发现此次层析恰好将洗脱峰B中的两个主要成分峰分开。将洗脱峰C、D收集冻干,分别命名为羊胎盘免疫调节因子-Ⅱ和Ⅰ.将两因子冻干粉再经Sephadex G-10(柱高30 cm,直径1.5 cm)凝胶柱脱盐后,反相HPLC柱检测分析,发现此步层析不仅达到脱盐效果,峰C、D中的其它一些含量较小的组分也被分离开来,层析出的目的组分羊胎盘免疫调节因子-Ⅰ和Ⅱ纯度进一步得到提高,分别达到98.89%和88.51%。因羊胎盘免疫调节因子-Ⅰ的纯度较高,将对其进行深入研究。2.羊胎盘免疫调节活性因子(SPIF-Ⅰ)的光谱、质谱检测将SPIF-Ⅰ稀释在波长100～400nm进行紫外扫描,结果显示在273nm处有单一特征吸收峰。SPIF-Ⅰ经ESI-MS质谱分析,m/z 304.8为其单电荷峰[M+H]+,所以SPIF-Ⅰ的分子量为303.8。SPIF-Ⅰ的光谱、质谱图谱均显示SPIF-Ⅰ为组分单一、纯度较高的小分子多肽。3.免疫活性检测E-玫瑰花环实验条件的筛选参照文献,对免疫活性测定脱E受体法中两个影响玫瑰花环形成的重要因素—脱E受体和受体重新合成时间分别设时间点,45℃恒温水浴脱E受体的时间设30min,