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目的明确紫草素对人甲状腺癌TT细胞凋亡的作用；并通过体外研究其凋亡过程中线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化,探讨线粒体信号转导通路在紫草素诱导甲状腺癌TT细胞凋亡过程中的作用。方法①MTT法测定紫草素对人甲状腺癌TT细胞增殖抑制率；②流式细胞仪检测紫草素作用后人甲状腺癌TT细胞凋亡；③流式细胞仪结合7-AAD及AnnexinV-PE双标记染色测定TT细胞凋亡；④透射电镜观察细胞凋亡的形态。⑤流式细胞仪检测线粒体膜电位的改变；⑥Western blotting分析紫草素对Bcl-2家族蛋白及caspases酶的表达的影响；⑦RT-PCR分析紫草素对Bcl-2家族蛋白及caspases酶的表达的影响。结果①不同浓度紫草素作用6-48h对TT细胞增殖均有抑制作用,并随药物浓度增加和作用时间延长而增强,呈剂量时间依赖,抑制率与浓度和时间均呈正相关(P<0.05)。②流式细胞仪分析空白对照组和各浓度紫草素处理组24h后,TT细胞凋亡图：2μg/ml、4μg/m1浓度的紫草素处理细胞24h见明显的亚二倍体峰；2μg/ml以上浓度紫草素的处理细胞可出现凋亡峰(亚二倍体峰),亚二倍体峰的比率与时间及浓度呈正相关,与对照组细胞相比差异有统计学意义(P<0.01),但未见明显的细胞周期阻滞。③为了进一步证实亚二倍体峰为凋亡峰,我们应用7-AAD及AnnexinV-PE双标记染色测定细胞凋亡。与阴性对照组相比,2μg/ml浓度的紫草素作用TT细胞24h,早期凋亡(AnnexinV-PE+/7-AAD□)单阳性细胞的百分比从空白对照组的0.1%到浓度增至8.03%；凋亡后期继发坏死即(AnnexinV-PE+/7-AAD+)双阳性细胞,从空白对照组的0.1%上升到11.33%；紫草素处理48小时后,早期凋亡(AnnexinV-PE+/7AAD□)单阳性细胞的百分上升为24.99%,凋亡后期继发坏死即(AnnexinV-PE双标AV+/PI+)双阳性细胞上升为14.19%；紫草素处理72小时后,主要以凋亡后期继发坏死即(AnnexinV-PE双标AV+/PI+)双阳性细胞为主,其比例上升为68.73%,而早期凋亡(AnnexinV-PE+/7AAD□)单阳性细胞只有百分6.1%。组间相比,差异有显著性(P<0.01)④透射电镜观察可见典型的细胞凋亡特征性变化：细胞全面皱缩,胞膜结构保持完整,胞核固缩或崩解而弥散在胞浆内,染色质浓缩并边缘化,表现为新月性胞核。⑤紫草素诱导线粒体膜电位呈剂量依赖性下降；与对照组相比,2μg/m1组,TT细胞R1从10.1%增至23.4%；4μg/ml组TT细胞R1从增至42.1%,均有统计学意义(p<0.05)。此结果说明,紫草素作用4h后,可引起TT细胞内线粒体膜电位的下降,造成线粒体膜的损伤。⑥电子显微镜观察到线粒体形态的发生了改变,细胞线粒体异常增大肿胀,线粒体嵴和膜破裂。⑦Western blotting和RT-PCR均显示紫草素对Bcl-2家族蛋白及caspases酶的表达的影响：紫草素能改变Bax和Bcl-2的表达,随着紫草素浓度的增加,Bax蛋白水平明显上调,而Bcl-2蛋白水平明显下调,呈剂量依赖性。2μg/ml和4μg/ml紫草素作用的TT细胞后,caspase-3和caspase-9呈剂量依赖性活化。结论紫草素能抑制人甲状腺癌TT细胞的增殖,其增殖抑制作用呈剂量和时间双重依赖性。2μg/ml以上浓度紫草素可诱导TT细胞凋亡,随着药物浓度的上升紫草素诱导TT细胞凋亡和坏死的水平上升,其中诱导诱导TT细胞凋亡是的主要原因。以浓度为2μg/ml的紫草素处理TT细胞24h,透射电镜可见细胞凋亡的典型形态：细胞全面皱缩,胞膜结构保持完整,胞核固缩或崩解而弥散在胞浆内,染色质浓缩并边缘化,表现为新月性胞核。紫草素通过线粒体信号通路诱导凋亡的可能机制是：紫草素能提高Bcl-2凋亡前体蛋白Bax的水平,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的水平,使Bax/Bcl-2比值增大,导致线粒体膜电位下降,并激活caspase-9/caspase-3酶联反应,从而导致凋亡的发生。目的通过体外研究紫草素对人甲状腺癌TT细胞的自噬作用。方法①透射电镜观察细胞自噬的形态；②Western blotting分析紫草素对Westernblot检测自噬标志物Beclinl和LC3蛋白的表达；③荧光显微镜观察自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的点状聚集情况,以明确自噬现象的发生。结果①透射电镜观察2μg/ml,4μg/ml紫草素处理组作用24h后TT细胞自噬的形态：处理后透射电镜观察发现TT细胞出现典型的自噬囊泡：双层膜包绕的圆形或椭圆形结构；②紫草素处理自噬相关基因Beclinl的表达明显低于阴性组,参与自噬降解的p62表达水平下降,其下降水平与剂量呈相关性,和自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的表达明显提高。③将TT细胞转染GFP—LC3质粒24h后,用紫草素处理24h,于荧光显微镜下观察,可见处理组与对照组相比,胞浆上出现大量的LC3-Ⅱ点状聚集。结论紫草素能引起人甲状腺髓样癌TT细胞的自噬：紫草素能诱导甲状腺髓样癌TT细胞的发生自噬。在透射电镜下可见自噬体。荧光显微镜下可观察到自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ。紫草素诱导TT细胞自噬,可能与降低自噬抑制基因Beclinl表达水平相关。