血栓栓塞性疾病严重威胁人类生命和健康,溶栓治疗是血栓性疾病安全有效的治疗手段。目前临床使用的溶栓药物疗效肯定,但还存在许多缺陷,而且价格昂贵。因此研制高效、快速、副作用小,价廉的新型溶栓药物成为当前的迫切需求。本试验构建了华根霉全长cDNA文库,并从中筛选出一种根霉纤溶酶基因；通过其在毕赤酵母中的表达,对该酶的酶学性质进行了初步的研究。通过SMART （Switching Mechanism At 5’end of the RNA Transcript）技术构建了华根霉全长cDNA文库。大肠杆菌转化子平板检测和PCR鉴定表明,所构建的文库库容为1.6×109cfu／mL,重组率为91.6%,达到了用于目的基因的分离筛选及克隆表达的建库要求。设计了四条简并引物并使用一种PCR方法从cDNA文库中分离出编码根霉纤溶酶的基因。该基因编码279个氨基酸,预测蛋白的分子量为30406 Da。根据基因序列比对得出此基因编码纤溶酶和其他纤溶酶类蛋白没有明显同源性。我们将此基因和pPIC9质粒相连接,构建了毕赤酵母表达载体,并通过在毕赤酵母中的表达对该纤溶酶功能进行了分析。实验结果表明重组工程菌分泌蛋白具有溶解血纤维蛋白的活性。本文还对重组纤溶酶的酶学性质进行了研究。SDS-PAGE电泳测定纤溶酶分子量为30 KDa。预测该纤溶酶的等电点为10.23±0.2。重组纤溶酶比活力23.14U／mL,纤溶酶最适作用温度37℃,在4℃～42℃范围内酶活性受环境温度影响较小。讨论了酸碱对该酶活性的影响,得出该酶的最适反应pH 8.4,在pH 6.8～8.8该酶最稳定。该酶对酪蛋白具有水解作用,在和生色底物反应的实验中发现其能水解的底物为D-Ile-Phe-Lys-pNA和N-Sueeinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA。在金属离子对酶活的影响试验中得出Zn2+、Fe2+、Cu2+、Mn2+、Co2+离子对酶有不同程度的抑制作用,而且大多数表现为离子浓度越大抑制作用越强。Na+、K+、Ca2+、Mg2+等金属离子对该酶的激活作用并不显著。本实验研究与已报道的华根霉纤溶酶的性质有较大的区别,如等电点,最适温度,pH,底物专一性等方面。说明华根霉能够分泌多种不同性质的纤溶酶,本研究只克隆得到其中一种纤溶酶基因。