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背景和目的:食管癌是一种源于食管粘膜上皮或腺体的常见恶性肿瘤。其发病率和死亡率分别占恶性肿瘤的第七位和第六位。虽然近年来食管癌的诊断和治疗取得了一定进展,但是食管癌的治疗效果仍不尽人意,5年生存率仅10-15%左右。因此,研究食管癌发生、发展的机制,可以为寻找临床上改善食管癌预后的新治疗靶点提供实验依据。miRNA是一种进化高度保守的内源性非编码RNA,被认为是调节转录后基因表达水平的一类重要因素。既往研究表明miR-195在胃癌、肝癌、结直肠癌等消化道肿瘤中异常表达,广泛调控细胞的增殖、分化、迁移、凋亡等重要生理和病理过程。研究发现miR-195能与Cdc42-3’UTR靶向结合,抑制Cdc42和Cyclin D1蛋白的表达从而阻滞食管癌细胞进入S期,抑制食管癌的增殖、侵袭和转移,但是具体的机制还不清楚。本研究拟探讨miR-195与其靶基因Cyclin D1对食管癌细胞增殖的影响。研究方法:1.通过qPCR检测miR-195在食管癌细胞系、食管癌组织和配对癌旁组织中的表达水平,并分析其表达量与患者临床病理特征的关系。2.通过MTT实验、细胞克隆形成实验、流式细胞仪检测转染miR-195模拟物和抑制物对食管癌细胞增殖的影响。3.通过qPCR检测食管癌组织和癌旁组织CCND1mRNA表达水平,并分析其与miR-195表达量的相关性。4.通过生物信息预测,qPCR、Western bolt验证miR-195下游靶基因。5.通过MTT实验、细胞克隆形成实验、流式细胞仪检测Cyclin D1回复对食管癌细胞增殖的影响。6.Western bolt、MTT实验、细胞克隆形成实验检测Cdc42、Cyclin D1回复对食管癌细胞增殖的影响。结果:1.食管鳞癌组织和细胞系中,miR-195的表达量下调。其表达量下降和较晚的疾病分期、较差的分化程度、脉管内癌栓以及神经侵犯有关。2.食管癌细胞中miR-195表达水平显著下调,其中ECA109和TE-8表达水平最低。3.转染miR-195模拟物抑制食管癌细胞系ECA109和TE-8的增殖能力;转染miR-195抑制物增强食管癌细胞系ECA109和TE-8的增殖能力。4.Cyclin D1是miR-195下游的靶基因。5.miR-195模拟物和Cyclin D1共转染显著增加食管癌细胞的增殖能力;miR-195抑制物和Cyclin D1共转染进一步增加食管癌细胞的增殖能力。6.共转染Cyclin D1-wt/mut和Cdc42对逆转miR-195引起的相应蛋白的表达有差别,但是对食管癌细胞的增殖能力的影响没有差别。结论:1.食管癌组织中miR-195表达下调,Cyclin D1表达上升,两者呈负相关。2.miR-195通过靶向作用于Cyclin D1-3’UTR,促进食管癌细胞停滞于G1期,抑制食管癌细胞增殖。3.回复Cyclin D1可以逆转miR-195对食管癌细胞增殖的影响。4.Cyclin D1可以和Cdc42竞争结合miR-195,减少miR-195对后者的抑制作用。同时,Cyclin D1的表达增加可以负反馈抑制Cdc42的表达。5.miR-195可以分别靶向调控Cyclin D1和Cdc42基因通过共同的途径影响食管癌细胞的增殖。