耐甲氧西林葡萄球菌PBP2a转肽酶区的原核表达及MAT检测方法的建立

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耐甲氧西林葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus,MRS)是一种医院感染的重要病原菌,由于其严重耐药的特性,给人类健康造成了严重威胁,而且近年来MRS在动物群中的检出率也越来越高。PBP2a蛋白作为MRS的特有的表面标志,广泛存在于MRS表面。本研究克隆了MRS PBP2a蛋白转肽酶区基因,并获得了其原核表达蛋白,在此基础上,建立了针对PBP2a蛋白的耐甲氧西林葡萄球菌的微量凝集试验检测方法,同时对临床分离的75株葡萄球菌进行检测。   利用PCR方法由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因组中扩增了PBP2a蛋白的转肽酶区基因,构建原核重组表达质粒pGEX-6p-1-TPase,并转化大肠杆菌BL-21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表明,得到的含有GST标签的融合蛋白大小约66KD,Westernblot鉴定表明,融合蛋白GST·TPase具有免疫原性。   以融合蛋白GST·TPase为抗原免疫家兔,制备多克隆抗体,并建立微量凝集试验检测方法,确定最佳反应条件。对临床分离的75株葡萄球菌的检测结果表明,耐甲氧西林葡萄球菌的分离率为57.3%,与药敏纸片法检测结果的符合率为92.0%。试验结果表明,成功建立了耐甲氧西林葡萄球菌微量凝集试验检测方法,为动物群体中耐甲氧西林葡萄球菌的监测及临床快速诊断提供了方便。
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