水貂圆环病毒（Mink circovirus,MiCV）是近些年我国新发现的病毒,水貂阿留申病毒（Aleutian mink disease virus,AMDV）是水貂阿留申病的病原体,这两种病毒给水貂养殖业带来了严重的经济损失,目前均没有有效的疫苗和特效药物用于其所引起疾病的防控。因此,建立快速、准确且方便应用的检测方法对于降低其所造成的经济损失显得尤为重要。为建立MiCV和AMDV荧光定量PCR检测方法,本研究根据MiCV Cap基因和AMDV VP2基因的保守序列,分别设计特异性引物和探针,通过反应体系和条件的优化建立了MiCV、AMDV两种单重荧光定量PCR检测方法及MiCV和AMDV双重荧光定量PCR检测方法。建立的方法分别只能检测到MiCV和AMDV,最低检测限均为1×10~1copies/μL,批间和批内变异系数均小于2%,表明建立的荧光定量PCR检测方法具有较好的特异性、敏感性和重复性。为研制MiCV和AMDV双重荧光定量PCR检测试剂盒,在建立的MiCV和AMDV双重荧光定量PCR检测方法的基础上,通过试剂盒原材料和体系的优选试验,确定了试剂盒各组成成分,组装了MiCV和AMDV双重荧光定量PCR检测试剂盒。试剂盒的特异性、敏感性和重复性验证结果表明,该试剂盒只能检测到MiCV和AMDV,最低检测限为1×10~1 copies/μL,批间和批内变异系数均小于2%。且应用该试剂盒对156份临床样品进行检测,结果MiCV、AMDV和二者混合感染的检出率分别为42.95%、62.18%和40.38%,而普通PCR的检出率分别为37.18%、55.13%和33.97%。为分析我国毛皮动物主要养殖地区MiCV和AMDV的流行情况,应用研制的双重荧光定量PCR检测试剂盒对采自吉林、黑龙江和山东省的996份水貂、狐狸和貉的血液样品以及293份环境样品进行MiCV和AMDV检测。结果MiCV、AMDV以及二者混合感染的检出率分别为49.40%、57.83%和41.97%。水貂的MiCV和AMDV检出率皆高于狐狸和貉;分窝期的MiCV和AMDV检出率低于配种期和打皮期;“≥1岁”组的检出率高于“＜1岁”组;公兽的检出率低于母兽。环境样本MiCV和AMDV的检出率均较高。为分析我国毛皮动物主要养殖地区MiCV和AMDV的遗传变异情况,对临床检测为MiCV和AMDV混合感染且Ct值较小的水貂、狐狸和貉的18份阳性样品进行MiCV Cap基因和AMDV VP2基因的扩增、测序、同源性和遗传进化分析。同源性分析结果显示,水貂、狐狸和貉MiCV Cap基因核苷酸同源性为97.8%-100.0%,推导氨基酸同源性为96.1%-100.0%。水貂、狐狸和貉AMDV VP2基因核苷酸同源性为92.6%-97.8%,推导氨基酸同源性为93.7%-98.0%。遗传进化分析结果表明,MiCV Cap基因系统进化树可分为3个亚群,水貂、狐狸和貉MiCV Cap基因在3个亚群中均有分布,山东来源的毒株位于3亚群,吉林和黑龙江来源的毒株位于1亚群和2亚群。AMDV VP2基因系统进化树可分为4个亚群,水貂、狐狸和貉AMDV VP2基因分布在各个亚群,吉林来源的毒株皆位于4亚群,山东来源的毒株在四个亚群中皆有分布,黑龙江来源的毒株主要位于1亚群。综上所述,本研究不仅建立了MiCV和AMDV快速有效的检测方法并组装了检测试剂盒,同时为我国MiCV和AMDV的流行病学研究提供新的数据,为MiCV和AMDV的防控提供技术支撑。