论文部分内容阅读
目的:本研究通过建立脂多糖诱导的ARDS小鼠及内皮细胞损伤模型,探讨落新对ARDS的保护作用及其作用机制,为临床预防和治疗ARDS提供理论依据。方法:1.体外实验:选用脐静脉内皮细胞作为本课题的实验细胞。①设Control组、LPS 组、LPS+Astilbin(12.5,25,and 50 μg/ml)组。LPS+Astilbin(12.5,25,and50μg/ml)组分别给予 Astilbin(12.5,25,and 50 μg/ml)预处理 24h,LPS 组与LPS+Astilbin(12.5,25,and 50μg/ml)组给予 LPS(1 μg/ml)刺激。6h 后,运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各实验细胞组肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、乙酰肝素酶(HPA)含量。②设Control 组、LPS 组、LPS+Astilbin(50 μg/ml)组,LPS+Astilbin(50μg/ml)组给予 Astilbin(50μg/ml)预处理 24h,LPS 组与LPS+Astilbin(50μg/ml)组给予LPS(1 μg/ml)刺激,6h后,运用活性氧检测试剂盒检测HUVECs胞浆ROS水平;线粒体超氧化物标记物Mitsox检测细胞线粒体ROS水平;免疫荧光检测细胞硫酸乙酰肝素表达变化。2.体内实验:成年健康雄性昆明小鼠60只随机分为5组,分别为:Control组、LPS组、LPS+Astilbin(12.5,25,and50mg/ml)组。LPS+Astilbin 组分别给予 Astilbin(12.5,25,and50mg/ml)预处理后,LPS(20mg/kg)腹腔注射建立模型6h后处死,留取肺组织及血清样本,进行HE染色、肺组织湿/干比,酶联免疫吸附法测定肺组织MPO含量,血清HPA、HS含量;Western blot技术检测MAPKs信号通路中关键调节蛋白(P38/p-P38、JNK/p-JNK、ERK/p-ERK)水平及活化状态。结果:Astilbin明显降低LPS刺激的HUVECs炎症因子(TNF-α、IL-6)的释放、减少细胞胞浆ROS及线粒体ROS的产生、减轻氧化损伤;Western blot结果显示,Astilbin预处理能通过阻断LPS诱导的ARDS小鼠肺组织ERK、P38和JNK的磷酸化,显著抑制LPS诱导对MAPK信号通路的激活;免疫荧光及ELISA结果显示,Astilbin通过降低LPS诱导的细胞损伤与ARDS小鼠中HPA、HS含量,保护血管内皮细胞多糖包被完整性。结论:Astilbin能够通过抗炎/氧化、抑制MAPK信号通路的活化、保护多糖包被的完整性,改善LPS诱导的ARDS损伤。