论文部分内容阅读
目的：观察四间羟苯基二氢卟酚(m-THPC)光动力(PDT)对不同转移潜能结肠癌SW480和SW620细胞质骨架蛋白的影响,以期为进一步阐明m-THPC光动力治疗结直肠癌的机制提供科学依据. 方法：1.采用激光共聚焦显微镜观察m-THPC在SW480和SW620细胞中的亚定位;2.采用倒置荧光显微镜观察m-THPC-PDT后SW480和SW620细胞的形态;3.采用MTT法检测m-THPC-PDT以及微丝稳定剂(JAS)联合m-THPC-PDT后SW480和SW620细胞的存活率;4.流式细胞术检测m-THPC-PDT后SW480和SW620细胞的凋亡率;5.Western Blot检测m-THPC-PDT以及JAS联合m-THPC-PDT后SW480和SW620细胞质骨架蛋白和凋亡相关蛋白的表达;6.采用划痕实验检测JAS联合m-THPC-PDT后SW480和SW620细胞的迁移. 结果：1.m-THPC主要定位于结肠癌SW480细胞的内质网和溶酶体中,而主要定位于结肠癌SW620细胞的线粒体和溶酶体中;2.m-THPC-PDT后,随着m-THPC浓度的增加,SW480和SW620细胞的正常形态逐渐发生改变,呈现典型的凋亡形态学特性;3.m-THPC-PDT后,SW480和SW620细胞的存活率随m-THPC浓度的增加而降低(P＜0.05);4.m-THPC-PDT后,SW480和SW620细胞的凋亡率随m-THPC浓度的增加而升高(P＜0.05),并且当m-THPC浓度为8.0μg/ml时,SW480和SW620细胞的凋亡率差异很大(60.07%和11.20%,P＜0.05);Bcl-2的表达随m-THPC浓度的增加而降低(P＜0.05)5.m-THPC-PDT后,SW480细胞F-actin、α-tubulin、β-tubulin和cytokeratin18的表达随m-THPC浓度的增加而降低(P＜0.05);SW620细胞F-actin、α-tubulin和β-tubulin的表达随m-THPC浓度的增加而降低(P＜0.05),而cytokeratin18的表达则相反(P＜0.05);6.JAS+m-THPC-PDT组与m-THPC-PDT组相比,SW480和SW620细胞的存活率没变(P＞0.05);7.JAS+m-THPC-PDT组与m-THPC-PDT组相比,SW480细胞F-actin的表达降低(P＜0.05),而Bcl-2的表达下降不明显(P＞0.05);SW620细胞F-actin和Bcl-2的表达下降(P＜0.05);8.JAS+m-THPC-PDT组与m-THPC-PDT组相比,SW480和SW620细胞的迁移能力增加. 结论：1.光敏剂m-THPC主要定位于SW480细胞的内质网和溶酶体中,而主要定位于SW620细胞的溶酶体和线粒体中,相同光敏剂在不同细胞内的定位可能不同.2.在m-THPC-PDT过程中,随m-THPC浓度的增高,两种细胞存活率随之下降;细胞凋亡率随之升高,m-THPC浓度是决定m-THPC-PDT效果的关键因素之一.3.m-THPC-PDT引起两种细胞的细胞质骨架破坏,尤其对微丝和微管的影响更明显.4.在SW480细胞,微管可能参与m-THPC-PDT诱导的细胞凋亡过程,微丝则可能参与m-THPC-PDT抑制细胞迁移的过程;在SW620细胞,微丝可能参与m-THPC-PDT诱导的细胞凋亡和抑制细胞迁移的过程.