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干旱是影响植物生长发育的主要环境因素,在我国干旱已成为制约农业发展的瓶颈。利用生物技术来增强农作物的抗旱性,成为解决干旱问题的有效途径。藓类植物由于特殊而极端的抗逆能力,成为研究抗旱机理和相关基因克隆的模式植物。紫萼藓科(Grimmiaceae)中绝大所数藓类能在环境恶劣的条件下生存,本身有较强的抗性,对它们进行分子生物学的研究,对改良农作物和经济作物有很大的意义。(1)以毛尖紫萼藓(Grimmia pilifera)为实验材料,提取植物的总RNA,根据本实验室构建的毛尖紫萼藓干旱cDNA文库中得到的泛素延伸蛋白基因EST序列设计引物,利用3’RACE (Rapid Amplification of cDNA End)技术分离克隆到全长cDNA序列,GenBank接收号为JQ659260。序列全长673bp,开放阅读框长471bp,编码156个氨基酸残基。预测该蛋白分子量为17.8kD,理论等电点为9.81,主要分布在细胞核和线粒体基质中。通过BlastP对其编码的氨基酸序列进行比对,结果显示毛尖紫萼藓泛素延伸蛋白与小立碗藓、北美云杉、葡萄、毛果杨的泛素延伸蛋白的同源性均在96%以上。(2)以东亚砂藓(Racomitrium japonicum)为材料,提取植物的总RNA,反转录成cDNA,利用同源序列法,根据毛尖紫萼藓Cu/Zn SOD基因cDNA序列设计特异引物,克隆得到了大小为565bp的基因片段,该片段ORF框长465bp,编码154个氨基酸残基,GenBank接收号为JQ659261。预测该蛋白分子量是15.5kD,理论等电点是5.77。负电荷残基(Asp+Glu)总数为18个,正电荷残基(Arg+Lys)总数为12个,不稳定系数是13.36。其编码的氨基酸序列包含了5个蛋白保守区,均为铜锌超氧化物歧化酶超家族(Cu-Zn Superoxide Dismutase superfamily),与NCBI数据库中其他植物的Cu/ZnSOD蛋白同源性很高。Blastn比对表明东亚砂藓Cu/Zn SOD基因与毛尖紫萼藓、小立碗藓相关基因的同源性高达99%和82%。(3)根据GH395、GH120基因的保守区设计特异引物,在紫萼藓科中的砂藓属、紫萼藓属与连轴藓中,通过RT-PCR在22个种中扩增到GH395基因同源序列,在18个种中扩增到GH120基因同源序列。对它们的核苷酸序列进行比对,发现GH395基因同源序列的核苷酸相似性均在80%以上,GH120基因同源序列的核苷酸相似性均在90%以上。根据这些同源序列构建的系统发育树,可以推测紫萼藓属与连轴藓属在进化过程中的关系较近。细叶连轴藓与紫萼藓属中的直叶紫萼藓、钝叶紫萼藓、卵叶紫萼藓、北方紫萼藓总是聚为一类,说明细叶连轴藓与这四种紫萼藓的植物遗传距离较近。