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苦瓜是一种药食同源的植物,最早在印度用于治疗糖尿病。目前,苦瓜降血糖的特性越来越受到人们的重视。针对苦瓜皂甙和多糖的应用前景,本论文综合苦瓜皂甙和多糖现有提取工艺及提取工艺最近几年的进展,阐述苦瓜皂甙和多糖含量的测定方法,确定浸提条件,膜分离工艺操作参数,层析结晶的操作参数以及苦瓜皂甙的生物活性研究。 1.由分光光度法绘制得到标准曲线,在此浓度范围内的样品溶液均可采用它们的回归方程计算出活性物质的含量。苦瓜多糖的标准曲线方程为y=0.0041x-0.0057,R~2=0.9997;人参皂甙的标准曲线方程为y=0.1647x-0.0026,R~2=0.9988;自制苦瓜皂甙的标准曲线方程为y=1E-0.4x-0.0005,R~2=0.9977;还原糖的标准曲线方程为y=0.0528x+0.0236,R~2=0.9974。 2.通过对水提法与醇提法比较,并进行正交实验,确定了水提法综合提取苦瓜皂甙和苦瓜多糖的最佳工艺条件为70℃,水浴3小时,料水比为1:20。若反复浸提3次,其收率可达85%。 3.膜过滤的最佳操作压力为0.02MPa,温度为常温。截流分子量为10万膜基本能将蛋白、脂类等生物大分子除掉,包括一些已经与多糖类结合的蛋白,去除率为65%。截流分子量为2万膜基本能将大分子多糖去除,去除率为70%。截流分子量为6000膜能允许大部分皂甙通过以及一些还原糖,经过三次循环后,皂甙的通过率可达50%。 4.AB-8型大孔吸附树脂对苦瓜多糖有特异吸附性,适于吸附苦瓜多糖,通过动态吸附和解吸过程,确定吸附流量为2ml/min,解吸流量为14ml/min,温度为室温,压力为常压,吸附容量为500cm~3处理约150ml多糖粗提液,收率为58.32%;NKA型大孔吸附树脂对苦瓜皂甙有特异吸附性,适于吸附苦瓜皂甙,通过动态吸附和解吸过程,确定吸附流量为2ml/min,解吸流量为14ml/min,温度为室温,压力为常压,吸附容量为500cm~3处理约200ml皂甙粗提液,收率为69.73%;苦瓜皂甙的结晶采用乙醚沉淀法,皂甙层析液脱水后用乙醚析出皂甙晶体;采用冷冻干燥法将苦瓜多糖结晶。 5.由于没有苦瓜皂甙标准品,本实验室所提取的苦瓜皂甙晶体与苦瓜汁(除糖、除脂、除蛋白)相比较,经高效液相色谱检测,出峰时间基本相同,由此可确定其浓度为94.42%;随后,对此晶体作核磁共振检测,经分析,与文献报道的结果基本一致,可确定其结构确实为苦瓜皂甙或苦瓜皂甙元。