樗蚕蚕沙化学成分及其抑菌活性研究

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蚕沙是蚕幼虫的粪便,化学成分丰富且具有广泛的生物活性。但目前蚕沙的利用率不高,除了少部分作为中药材使用外,大多数都作为废弃物丢弃,属于一种有待开发的生物资源。通过查阅蚕沙相关文献得知蚕沙可以对食物中的化学物质进行富集。利用这一特性,本试验选用富含杀菌活性物质的黄檗的树叶作为饲料饲养喜食黄檗叶的樗蚕,并将樗蚕蚕沙作为供试材料,探究以蚕沙作为植物源杀菌剂来源的可能性,拓宽蚕沙的使用范围,提高资源利用效率。利用甲醇提取、甲醇-水-二氯甲烷萃取、硅胶柱层析、凝胶柱层析、高效液相色谱等分离技术从樗蚕蚕沙中分离纯化出9个单体化合物,利用高分辨质谱和核磁共振等技术及查阅相关文献对这9个单体化合物进行了结构鉴定并进行了抗菌活性的研究,研究结果如下:1.采用柱层析和半制备高效液相色谱等技术对樗蚕蚕沙进行分离纯化,得到9个单体化合物。利用质谱与核磁共振等分析鉴定技术,确定了这9个化合物名称,分别为吐叶醇(化合物1)、(3S,5R,6S,7E,9R)-5,6-epoxy-3,9-dihydroxy-7-megastigmene(化合物2)、黄柏酮(化合物3)、neophellamuretin(化合物4)、黄柏苷(化合物5)、赪酮甾醇(化合物6)、赪酮甾醇3-O-β-D-葡萄糖苷(化合物7)、α-亚麻酸甲酯(化合物8)和叶绿醇(化合物9),这9个化合物均从樗蚕蚕沙中首次发现。2.通过微量肉汤稀释法对浓度为50μg/mL的化合物1-9进行了11种植物病原真菌和5种细菌的抑菌活性研究,结果表明化合物1-3,5-9对11种植物病原真菌均有一定的抑菌活性,其中化合物1(吐叶醇)显示出对多种植物病原真菌的抑菌活性。化合物1-5对5种细菌有一定的抑菌活性,其中化合物1和2对枯草芽孢杆菌显示出较好的抑制作用,抑菌率在70%以上。3.根据微量肉汤稀释法的抑菌结果,筛选出活性较好的化合物进行进一步研究。采用菌丝生长速率法测试化合物1(吐叶醇)和化合物3(黄柏酮)对玉米大斑病菌、水稻纹枯病菌、向日葵菌核病菌和瓜果腐霉病菌的菌丝生长抑制情况,所得数据用SPSS软件计算出EC50值并求出独立回归方程。结果表明吐叶醇对四种植物病原真菌均显示出良好的抑菌活性,对向日葵菌核病菌的菌丝抑制效果最好,EC50值约为47.144μg/mL。黄柏酮对水稻纹枯病菌和向日葵菌核病菌有一定的抑制作用。本试验第一次对樗蚕蚕沙的化学成分进行了分析,其抑菌试验结果证明了樗蚕蚕沙中富含多种抗菌活性物质且抗菌谱比较广泛,表明了樗蚕蚕沙具有成为新型植物源杀菌剂或作为植物源杀菌剂的来源的潜力,拓宽了樗蚕蚕沙的应用范围,为蚕沙的综合利用提供了新的思路。
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