富血小板血浆含有高浓度多种生长因子，能促进种子细胞的增殖、移动、分化以及胶原蛋白合成、刺激血管化的作用。但由于富血小板血浆所包含的生长因子众多，互相之间的作用机制难以尽述，加之富血小板血浆的制作方法不同，各种方法所得富血小板血浆中血小板含量、激活率不同，所含生长因子浓度不同。因此，国内外学者对富血小板血浆的作用看法不尽一致。 目的：抽取比格犬骨髓间充质干细胞并分离纯化后，采用3种不同方法制备富血小板血浆，观察血小板浓度及活化率，以选择合适的制作方法。PRP加入激活剂制成凝胶，分析其生物相容性，观察不同浓度富血小板血浆凝胶对犬骨髓间充质干细胞增殖的影响。 方法：首先抽取比格犬骨髓，采用密度梯度离心法取密度为1.079±0.002g/ml的Percoll液分离骨髓间充质干细胞，经贴壁生长法培养、扩增并纯化细胞后流式细胞仪鉴定干细胞表型，MTT法测定3、5、10代细胞生长曲线，成软骨及成骨诱导检测其多向分化能力；按照Landesberg法，Aghaloo法及改良两步离心法3种不同方法制备PRP，测定血小板浓度、回收率及CD62P表达率。再将PRP与激活剂反应形成凝胶，人工计数细胞黏附率，MTT法测定细胞毒性；将不同浓度PRP凝胶作用于BMSCs，MTT法观察细胞各个时间点吸光度，分析PRP对BMSCs的增殖效应及最佳的浓度。 结果：犬骨髓间充质干细胞经密度梯度离心法联合贴壁生长法分离、纯化、扩增，细胞生长迅速，增殖明显，经流式细胞仪检测传5代细胞有96％表达CD44，95％表达CD29，而只有5％表达CD34，并可多向分化，具有骨髓间充质干细胞的基本特征。比较3种PRP制作方法，改良两步离心法血小板回收率较高而CD62P表达率相对较低。故以改良两步离心法相对较好。PRP可在早期显著促进骨髓间充质干细胞增殖，其增殖强度与PRP浓度相关，低浓度组(5％、6.25％、7.5％)普遍取得较佳的增值效应，其最大增殖度出现在6.25％组；而8.75％、10％后期(10d～14d)细胞增殖均减缓而进入平台期。 结论：1、采用改良两步离心法获得富血小板血浆的血小板浓度、回收率高，而CD62P表达率低，较其他方法有明显优势。2、富血小板血浆凝胶体外实验安全、无毒，生物相容向良好，可显著促进骨髓间充质干细胞增殖，其增殖强度与PRP浓度相关，6.25％PRP凝胶增殖显著。3、犬骨髓间充质干细胞生长增殖能力较强，具有多向分化能力，能够长期培养，符合组织工程种子细胞的要求。