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目的:非小细胞肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因之一。基于铂类的化疗组合方案给非小细胞肺癌及转移癌患者提供了一个有效的治疗方案,但大多患者都会不可避免地出现疾病的进展。突变型EGFR的发现与一代EGFR-TKI的应用为非小细胞肺癌的治疗提供了有效的新方法,迎来肺癌个性化治疗的新时代。以osimertinib为代表的第三代EGFR-TKI是针对一代药物的耐药而研发的药物,并且在临床上取得了良好疗效。二甲双胍是一种被广泛应用的双胍类降糖药,有临床研究发现其可以减少糖尿病患者肿瘤的发生率并改善预后,并且有研究表明二甲双胍与EGFR-TKI联合用药可产生协同抗肿瘤效应。二甲双胍的抗肿瘤效应机制可能与AMPK/m TOR通路的激活有关,但由于二甲双胍作用机制复杂,故机制尚未被明确阐释,仍需要进一步研究证明,本实验旨在研究osimertinib联合二甲双胍对吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌PC9/GR细胞的生长抑制效应及其可能机制。方法:体外培养PC9/GR细胞,分为osimertinib处理组、二甲双胍处理组、osimertinib联合二甲双胍处理组,在osimertinib和二甲双胍单药或联合作用于PC9/GR细胞后,应用MTT法检测不同药物处理组处理后对PC9/GR细胞的抑制率影响,计算半数抑制浓度(halfinhibitoryconcentration,IC50)与联合指数(combinationindex,CI);参考IC50的药物剂量处理细胞,采用荧光染色法观察和流式细胞术检测osimertinib和二甲双胍单药或联合诱导细胞凋亡的变化;采用Western blot法检测各药物处理组细胞磷酸化及非磷酸化的AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)和70ku核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)蛋白的表达水平,并采用Image J软件分析灰度值。结果:MTT结果提示:osimertinib和二甲双胍对PC9/GR细胞的IC50值分别为(12.0±5.53)nmol/L和(4.57±1.28)mmol/L,osimertinib和二甲双胍双药联合作用可显著抑制PC9/GR细胞的增殖,作用强于各单药组(P<0.05),表现为协同作用(CI<1);荧光显微镜下观察发现:与对照组比较,osimertinib及二甲双胍处理组均可见处于凋亡状态的细胞增多;osimertinib联合二甲双胍处理组与上述两单药处理组相比,凋亡细胞增加更为明显;流式细胞术发现:osimertinib处理组和二甲双胍处理组PC9/GR细胞的凋亡率分别为(7.88±1.21)%和(8.38±1.23)%,osimertinib联合二甲双胍处理组PC9/GR细胞的凋亡率为(22.72±3.44)%。两药联合后细胞的凋亡率明显高于单药组,差异有统计学意义;Western blot法检测结果显示:与对照组比较,二甲双胍处理组及两药联合处理组PC9/GR细胞中p-AMPK蛋白的表达水平明显上调;osimertinib及二甲双胍单药处理组细胞中p-P70S6K的表达水平下调,相较于单药组,两药联合处理组中p-P70S6K下调水平更加明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Osimertinib和二甲双胍联合用药对PC9/GR细胞的增殖有显著抑制作用并可以促进其凋亡的发生,具有协同作用。其机制与可能与AMPK/m TOR通路中p-AMPK蛋白上调与p-P70S6K蛋白水平下调有关。