榨菜与紫甘蓝嫁接嵌合体诱导的可遗传变异及其分子机理研究

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本论文以具有表型和分子标记的榨菜(Brassica juncea Coss. var. tumida Tsen et Lee)与紫甘蓝(B. oleracea L. var. capitata L.)的种间周缘嫁接嵌合体植株为研究材料,通过植物形态学、细胞学、组织解剖学及分子生物学等手段,系统地研究了嫁接对植物生长发育特性的影响;通过对嵌合体有性后代中出现的变异表型特性的研究,探索了植物嫁接变异的产生特点及遗传规律;通过对嫁接后代及其亲本在基因组DNA序列水平和转录水平上的差异分析,初步研究了物种间嫁接诱导遗传变异的原因;通过嫁接体中不同物种细胞谱系之间遗传信息交流的研究,阐释了嫁接变异产生的可能机制。本研究所取得的主要研究结果如下:(1)利用榨菜与紫甘蓝的嫁接嵌合体TCC和TTC (L1-L2-L3; L1-茎尖分生组织层最外层,L2-中间层,L3最内层;T=榨菜,C=紫甘蓝)系统地研究了嫁接对植物体生长发育特性的影响,包括茎端分生组织(SAM)及SAM衍生器官。研究发现,嫁接改变了植物的SAM、营养器官、生殖器官的发育模式。此外,对于植物组织、器官的细胞层起源追踪的结果表明:大多数组织和器官是由SAM的L1、L2和L3谱系细胞层共同发育而成,但是它们在不同器官组织中的贡献量不同;Ll和L2参与了叶缘的发育;不定根是由L3层单独发育而成的;花粉主要起源于L2层。(2)在嵌合体TCC中;异源Ll层显著地影响了胚胎的发生并导致其发生败育。解剖学观察发现,嵌合体TCC胚囊内不同谱系起源的组织细胞间发育的不协调性是胚胎发生败育的原因;随后我们利用胚抢救技术成功获得了TCC的自交后代植株;然而在嵌合体TTC中,异源的L3层对其育性的影响不显著。对嵌合体后代植株的形态学及细胞生物学的研究表明,嵌合体TCC和TTC的自交后代分别为紫甘蓝和榨菜谱系起源。(3)嫁接嵌合体TTC后代植株出现了显著的嫁接表型变异。通过植物形态学及遗传学研究发现,TTC的自交后代植株与榨菜亲本相比表现出茎尖封顶和叶型变异等表型;而且叶型变异的产生具有方向性和可重复性,并能够稳定地遗传给后代,属于细胞核遗传,符合孟德尔遗传规律。(4) ISSR多态性分析未发现嫁接改变植物基因组的证据,但是抑制性消减杂交结果表明嫁接诱导了TIC后代植株内很多基因的差异表达。(5)通过small RNA测序我们在嵌合体的榨菜回复系植株中检测到了紫甘蓝谱系特异的小RNA。研究表明:小RNA类遗传信号物质能在植物细胞之间移动;不同谱系细胞间小RNA的交流可能是诱导嫁接变异产生的重要原因之一。本研究利用嫁接嵌合体植株成功地初步揭示了嫁接变异的分子机制,为植物细胞间的互作机制研究提供了良好的实验体系,也为嫁接技术的合理利用及嫁接育种手段的推广提供了理论依据。
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