“记忆是智慧之母”,作为人类思维活动的基本环节,学习记忆能力对智慧的形成、意识的产生以及知识的积累都起着举足轻重的作用,而人入中年,抑或疲劳、疾病等都会导致学习记忆能力的下降,尤其随着人们生活节奏的加快、工作压力的上升,其中由疲劳所导致的学习记忆能力下降问题日益严重,而受到人们的广泛关注。探寻出一套有效防治疲劳后学习记忆能力下降的方案,便有着十分重要的现实意义。对此,中医传统上多从心、从肾论治,以补肾养心立法；而本课题组在进行国家自然科学基金资助项目“理气扶正类中药消除运动性疲劳的机理研究”中发现,运动性疲劳所致学习记忆能力下降的机理与肝失疏泄有关,疏肝理气类中药能显著改善学习记忆能力的下降。那么,对于复合疲劳因素导致的学习记忆能力下降,这两种治疗思路的效果如何?为此,我们从理论研究入手,结合实验研究,探讨了疏肝法、补肾养心法对疲劳后学习记忆能力下降的干预作用及其可能的分子生物学机制,以期对临床治疗提供参考。1理论研究本研究从中医对学习记忆和疲劳的认识入手,探讨了疲劳-心肝肾-学习记忆的关系,认为疏肝法、补肾养心法都能改善疲劳导致的学习记忆能力下降,并且两者存在协同作用。具体来说,心、肾、肝及心肾相交,都与学习记忆有着密切的联系。其中,肝气的疏泄还能加强心肾之间的交通,这种肝参与的心肾相交回路,在从五脏神的角度解释学习记忆的过程中,可以对应为,心神主持获取外界事物的过程,肾志关乎存储所获信息的过程,肝魂负责提取信息的过程,如此,循环往复。又由于疲劳会伤及心、肾、肝三脏之气阴,虚则补之,而顺其性方为补,具体来说,“心欲软”,柔顺养之是为补,“肾欲坚”,刚健补之是为补,“肝欲散”,条达疏之是为补,故尔,养心补肾疏肝,名虽略有不同,实则皆为补,用于改善疲劳所致学习记忆能力下降自是可行。2实验研究本课题在建立疲劳动物模型的基础上,评价了模型动物学习记忆能力的改变,并采用免疫组化、Western blot和real time PCR这些实验技术,系统地观察了疲劳模型大鼠海马c-fos的蛋白表达及其mRNA的变化。同时应用疏肝方药(四逆散加减)、补肾养心方药(生慧汤加减)以及合方方药(疏肝方药和补肾养心方药1：1的合方)对模型动物进行干预,探讨药物的调节作用及其机制。主要内容和结果如下：2.1疲劳大鼠动物模型的建立本研究应用大鼠游泳运动结合睡眠剥夺的复合方法建立疲劳动物模型,较好地模拟了人类体力疲劳和脑力疲劳过程,是一种较为理想的疲劳造模方法。通过对模型动物体重、一般情况、平衡实验的观察及LDH这些疲劳常用评定指标的检测证实,本研究成功地建立了疲劳大鼠动物模型。通过运用疏肝方药、补肾养心方药、合方方药对模型进行干预,证实三方都有一定的改善疲劳的作用。其中,疏肝方药的主效应、补肾养心方药的主效应、疏肝方药与补肾养心方药的交互作用都发挥了作用。2.2疲劳大鼠学习记忆能力的评定及疏肝法、补肾养心法的调节作用本研究部分通过Y迷宫实验,选用正确反应率、错误反应次数、达标所需训练次数和总反应时间,这些指标综合评价模型动物学习记忆能力的改变,以及各中药方药的调节作用。结果显示,造模前各组大鼠的学习记忆能力具有一致性,组间无统计学差异。造模后,模型组大鼠反应的正确程度比正常组明显下降,学习记忆能力受损。疏肝方药、补肾养心方药都能提高动物的正确反应率,减少错误反应次数；合方方药能提高动物的正确反应率,减少错误反应次数、达标所需训练次数和总反应时间。说明各中药组都能有效改善实验动物学习记忆能力的下降,而合方方药的效果最为显著,其中我们还发现,疏肝方药的主效应能减少动物的反应时间,疏肝方药和补肾养心方药的交互作用能提高动物的正确反应率。2.3疏肝法、补肾养心法对疲劳大鼠c-fos蛋白表达的免疫组织化学研究研究结果显示,c-fos阳性反应物在海马以DG和CA3的颗粒细胞、锥体细胞表达为主。模型组大鼠的海马除CA1区外,DG、CA3区免疫阳性反应物的IOD都比正常组明显减少,疏肝方药和补肾养心方药能上调海马DG、CA3的蛋白表达,而合方组对海马DG、CA3及CA1的蛋白表达都能明显上调,且在CA1区,疏肝方药和补肾养心方药的交互作用对c-fos的蛋白表达有上调作用。2.4疏肝法、补肾养心法对疲劳大鼠c-fos蛋白表达的Western blot研究研究结果表明,与正常对照组比较,模型组大鼠海马的c-fos蛋白表达明显下调,疏肝方药、补肾养心方药和合方方药都能上调海马的c-fos蛋白表达,而尤以合方方药为著。2.5疏肝法、补肾养心法对疲劳大鼠c-fos mRNA表达的real time PCR研究结果显示,海马c-fos mRNA的表达水平比正常组明显下降,三个中药用药组海马的c-fos mRNA表达均有不同程度的上调。3小结本课题在既往研究的基础上；对疏肝法与补肾养心法改善疲劳导致学习记忆能力下降的作用情况进行了研究。理论研究从中医对疲劳和学习记忆的认识入手,认为疏肝法和补肾养心法都能改善疲劳后的学习记忆能力下降,并且两者之间存在协同作用。这一认识在后续的实验研究得到了证实,并进一步对其可能的分子生物学机制进行了探讨。实验研究在游泳复合睡眠剥夺建立疲劳动物模型的基础上,应用疏肝、补肾养心、合方方药对模型动物进行干预。通过行为学实验,观察到模型动物的学习记忆能力有所下降,并且各中药方药有不同程度的调节作用。在进一步的免疫组化、Western blot和real timePCR研究中发现,疲劳后学习记忆能力下降的分子生物学机制可能是下调了海马c-fos mRNA的水平,进而削弱了蛋白的表达,而疏肝、补肾养心方药,尤其合方方药能改善疲劳导致的学习记忆能力下降,其机理与疏肝补肾养心方药及两者的协同作用能上调c-fos的表达有关。