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本室前期工作已对灵芝肽进行了初步分离,并且证实灵芝肽是一种较好的抗氧化活性物质。为寻求灵芝肽最佳分离纯化条件并探讨其保肝功能,本实验采用配位色谱法、离子交换柱层析、RP-HPLC,以灵芝样对羟基自由基的抑制率为抗氧化活性指标,对灵芝肽进行了进一步分离纯化;采用氨基酸分析仪、分光光度计、电位测定仪比较了灵芝肽各组分的抗氧化能力和还原能力;采用生化分析仪、显微镜研究了混合灵芝肽（MGLP）对四氯化碳、乙醇诱导肝损伤小鼠的辅助保护作用。结果如下: 1.将发酵灵芝粉经水提、过分子量为10000Da的超滤膜后得小分子混合物GLL。将未脱色GLL采用SephadexG-25、SephadexG-15进行分离,均未能将肽类物质与色素分开;将GLL经活性炭脱色后采用Sephadex G-25、Sephadex G-15分离,肽类物质无法与小分子糖类分开。采用配位色谱Cu2+-SephadexG-25柱可以将脱色GLL中肽类物质与氨基酸很好地分离,得GLP-Ⅰ、GLP-Ⅱ、GLAA三个峰。 氨基酸分析表明GLP-Ⅰ、GLP-Ⅱ、GLAA中氨基酸总量分别为88.33%、91.01%、93.18%,GLP-Ⅰ与GLP-Ⅱ中主要以酸性氨基酸为主,GLP-Ⅰ中酸性氨基酸占氨基酸总量的39.3%;GLP-Ⅱ中酸性氨基酸含量占为总氨基酸含量的71.52%。GLP-Ⅱ为高F值寡肽,GLAA为高F值混合氨基酸。DEAE-Cellulose阴离子交换树脂在可以将GLP-Ⅱ分为三个级份:GLP-ⅡA、GLP-ⅡB、GLP-ⅡC;GLP-ⅡC进一步经RP-HPLC分离后得2个峰。 2.MGLP在Cu2+抗坏血酸诱导卵磷脂脂质氧化体系及非脂质体系中抑制氧化能力均高于GLPⅠ、GLPⅡ和GLAA,在卵磷脂脂质氧化体系中其IC50为0.984mg/ml;其还原作用也优于GLPⅠ、GLPⅡ和GLAA。 3.MGLP对小鼠化学性肝损伤的保护作用: a) 灌胃MGLP后,CCl4诱导肝损伤小鼠体重明显增加,小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活力,丙二醛（MDA）含量均有所下降。当MGLP剂量为400mg/kg.bw和800mg/kg.bw时,血清中ALT及AST活力显著低于CCl4模型对照组,肝组织病理学为阳性,MGLP对四氯化碳引起的肝损伤有辅助保护作用。 b) MGLP可使乙醇诱导肝损伤组小鼠血清中还原型谷胱甘肽（GSH）含量明显升高,丙二醛（MDA）、甘油三酯（TG）含量明显降低。当剂量为800mg/kg.bw时,血清中MDA和TG含量显著低于乙醇模型对照组,GSH含量显著高于乙醇模型对照组,肝组织病理组织学结果为阳性,MGLP对乙醇引起的肝损伤有辅助保护作用。