吴茱萸碱对人前列腺癌DU145细胞的体外作用及其机制的研究

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目的:在体外研究吴茱萸碱(evodiamine,evo)对人前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法:细胞培养技术体外培养人前列腺癌DU145细胞,用不同浓度的吴茱萸碱进行干预。MTT法检测各浓度吴茱萸碱对人前列腺癌DU145细胞增殖的影响;流式细胞术测定吴茱萸碱对细胞周期和凋亡的影响;倒置光学显微镜下观察DU145细胞形态变化;免疫细胞化学法检测前列腺癌DU145细胞内PCNA的表达情况;Western Blot方法检测t-ERK、p-ERK及Cleaved Caspase-3的表达。用SPSS13.0统计软件处理所得结果,以P<0.05为显著性检验水准。结果:1吴茱萸碱对DU145细胞增殖具有抑制作用:MTT显示,DU145细胞增殖活力被吴茱萸碱所抑制(P<0.05)。Western印迹及免疫细胞化学染色结果显示, DU145细胞经过吴茱萸碱处理后细胞内增殖标志物PCNA表达降低,细胞内总的ERKl/2蛋白表达水平无明显变化,而磷酸化ERKl/2蛋白与对照组相比水平下降。2吴茱萸碱对DU145细胞周期的影响:流式细胞分析技术结果显示,经过吴茱萸碱作用24小时后各个浓度组(10-7M、10-6M、10-5M)所处理结果显示各周期内的细胞数量发生明显变化,其中G1、S期细胞明显减少而G2/M期细胞积累增多,其差异有统计学意义,即吴茱萸碱使DU145细胞增殖阻滞于G2/M期。3吴茱萸碱可诱导DU145细胞凋亡:流式细胞分析技术结果显示,吴茱萸碱各浓度组(10-7M、10-6M、10-5M)作用于DU145细胞72h后,凋亡细胞明显增多,且凋亡率随着药物浓度的增加而增加,呈现药物浓度依赖方式,经过各浓度组吴茱萸碱处理后的DU145细胞所测得的凋亡率结果差异使用单因素方差分析有显著性差异(P<0.05)。Western印迹结果表明,不同浓度吴茱萸碱处理DU145细胞24小时后,Cleaved Caspase-3的相对表达量明显升高,并随着吴茱萸碱浓度的增加而逐渐升高,差异具有显著性(P<0.05)。结论:1吴茱萸碱抑制人前列腺癌DU145细胞增殖,可能通过抑制ERK磷酸化水平从而实现抑制其增殖作用。2吴茱萸碱可诱导DU145细胞凋亡,推测通过激活Caspase-3上调Cleaved Caspase-3的表达量是吴茱萸碱诱导DU145细胞凋亡的机制之一。
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