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目的:建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测地高辛血药浓度的方法学并通过HPLC-MS/MS法和微粒子酶联免疫法(MEIA)测定临床采集的地高辛血浆样本,比较两种方法的差异性和相关性。方法:用HPLC-MS/MS法测定人血浆地高辛血药浓度,通过专属性、标准曲线与最低定量限、检测线(LOD)、精密度、准确度、基质效应和提取回收率以及稳定性实验进行方法学验证;取已知地高辛浓度的质控样本,分别采用MEIA法与HPLC-MS/MS法测定,三组数据分别进行配对t检验;收集我院2013年接受地高辛治疗患者的稳态谷浓度血浆样本50例,分别采用MEIA法与HPLC-MS/MS法测定,两组数据进行配对t检验。结果:结果表明HPLC-MS/MS法具有较高的敏感度和特异性,符合方法学验证,药物回收率稳定,日内和日间的变异系数均小于15%。在0.05~10.0 ng/m L浓度范围内,生物样品标准曲线的相关系数r>0.99,质控样本及冻融试验均符合要求,被测地高辛成分的峰面积和浓度在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,检测限、定量限、精密度和稳定性均符合要求,能应用于测定血浆中地高辛的浓度;MEIA法与HPLC-MS/MS法测定地高辛质控样品结果显示MEIA法测定的结果高于已知结果并且具有统计学差异(P<0.05),HPLC-MS/MS法测定的结果与已知结果没有统计学差异(P=0.30),MEIA法与HPLC-MS/MS法测定地高辛质控样本的结果也没有统计学差异(P=0.15),两种方法没有统计学差异,HPLCMS/MS法的测定结果比MEIA法更接近于样本真实结果;MEIA法与HPLC-MS/MS法测定50例地高辛血浆样本,MEIA法和HPLC-MS/MS法测定结果的均数分别为2.98ng·m L-1、0.06ng·m L-1,MEIA法的测定结果显著高于HPLC-MS/MS法测定结果,具有显著的统计学差异(P<0.01)。说明MEIA法在测定地高辛血药浓度时干扰误差较大。结论:HPLC-MS/MS法具有较高的敏感度和特异性,符合方法学验证,能应用于测定血浆中地高辛的浓度。HPLC-MS/MS法和MEIA法在测定地高辛样本时具有显著的统计学差异,MEIA法的测定结果误差较大,这可能与其受地高辛样免疫活性物质(DLIS)干扰密切相关。HPLC-MS/MS法的测定结果更接近于样本真实结果。此方法完全可以满足地高辛临床血药浓度的监测的需求,值得临床推广。