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目的探讨microRNA-34b及caspase-9在TPM(托吡酯)治疗癫痫大鼠海马组织中表达的差异及其作用的研究。方法将100只健康成熟的雄性SD大鼠随机分成四组:正常组(n=25),癫痫组(n=25),TPM低剂量组(n=25)及TPM高剂量组(n=25)。采用锂-匹罗卡品诱发大鼠癫痫发作,选取癫痫发作IV-V级,并持续抽搐30min的大鼠为实验组。将致癫成功的大鼠平均分成3组,对TPM高剂量组(80mg/kg.d)、低剂量组(40mg/kg.d)每日同一时间灌胃制作药物组模型,正常组及癫痫组予生理盐水(4ml/kg.d)灌胃,灌胃28d后取大脑及海马组织。HE染色观察大鼠海马组织的病理改变;采用芯片分析法、实时定量PCR法观察各组海马组织中microRNA-34b的差异性表达;利用蛋白免疫印迹法及免疫组化染色检测各组海马中caspase-9的变化。结果1.芯片分析结果发现：与正常对照组相比,癫痫组中部分microRNA(34b、204、2964、207、210、351、764、511)是上调的,部分 microRNA(136、219、382、337、31、383、499、30b、582、708、488、598)是下调的。不同剂量TPM治疗后,上调的microRNA部分出现了下调,下调的microRNA部分出现了上调,其中microRNA-34b表达较为明显。2.实时定量PCR检测结果;与正常对照组相比,癫痫组中microRNA-34b的表达显著上调,差异有明显的统计学意义(p<0.01)。经高剂量TPM治疗后,microRNA-34b的表达与癫痫组相比明显下调(p<0.01),低剂量TPM治疗后,microRNA-34b的表达与癫痫组相比也发生了明显下调(p<0.01),其中,高剂量TPM组比低剂量TPM组microRNA-34b下调的明显(p<0.05)。3.蛋白免疫印迹法:癫痫组大鼠海马组织中caspase-9蛋白表达明显高于正常组(p<0.01)。与癫痫组对比,低剂量TPM组中caspase-9蛋白的表达是下降的(p<0.05),而高剂量TPM组中caspase-9蛋白的表达与癫痫组相比显著下降(p<0.01),其中,高剂量TPM组比低剂量TPM组caspase-9蛋白表达下降的更为明显(p<0.01)。4.HE染色:正常对照组可见大小均一、形态规整、排列整齐的细胞。相反,癫痫组大鼠齿状回DG区颗粒细胞,海马回CA1区小椎体细胞、CA3区大椎体细胞排列疏松紊乱、细胞肿胀、边缘不清,胞核、胞质深染,染色质聚集成块,细胞成空泡样改变。而经TPM治疗后,细胞形态有所改善,其中,高剂量TPM组比低剂量TPM组细胞形态改善的更为明显。5.免疫组化:癫痫组中caspase-9蛋白的表达明显高于正常对照组(p<0.01)。低剂量TPM组中,caspase-9蛋白的表达与癫痫组相比是下降的(p<0.05),高剂量TPM组中,caspase-9蛋白的表达与癫痫组相比下降的更为显著(p<0.01),其中,高剂量TPM组比低剂量TPM组caspase-9蛋白表达下降的明显(p<0.05)。结论1.癫痫大鼠海马中,microRNA-34b出现了上调。经TPM治疗后,microRNA-34b出现了下调,且随TPM剂量的增加,microRNA-34b表达的更明显。2.TPM预处理后caspase-9表达升高,提示其神经保护作用的存在