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目的建立胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的原代培养方法，研究神经酰胺对其体外增殖的影响，并观察神经酰胺在AECⅡ单层通透性变化中的作用，为进一步研究神经酰胺在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征发病机制中的作用及地位奠定实验基础。方法1.取1只妊娠17.5d的SPF级ICR小鼠，将其体内的胎鼠AECⅡ用胰蛋白酶消化法分离后，通过差速贴壁法纯化。将获得的AECⅡ在倒置相差显微镜下观察细胞形态及生长情况，并应用碱性磷酸酶染色法及电镜进行鉴定；2.将AECⅡ制成细胞悬液，调整细胞浓度为1×105个/ml，分别加入终浓度为0（溶剂对照，DMEM）、25、50、60、70、80、90、100μmol/L的神经酰胺溶液，培养12、24和48h后进行MTT试验；3.在Transwell上构建AECⅡ单层；倒置显微镜及跨上皮电阻测量仪观察细胞单层生物学特征；4.应用跨上皮电阻测量仪及辣根过氧化物酶标记法检测神经酰胺对AECⅡ单层通透性的影响。结果1.用此方法所得的AECⅡ产量为1×106-4×106个/只孕鼠，纯度为80%以上，细胞活力90%以上。2.随着神经酰胺染毒浓度的升高和染毒时间的延长，AECⅡ细胞增殖抑制率呈上升趋势。3.3×105/cm2和的AECⅡ接种Transwell后，TER随接种时间延长迅速升高，接种后第48h达最高，尔后TER开始逐渐下降，而倒置显微镜观察到细胞接种后第36h已融合成单层；5×105/cm2的AECⅡ接种Transwell后，TER达高峰时间提前到接种后第36h，尔后TER开始逐渐下降；不同密度接种组的TER最高值间比较无显著性差异（p>0.05）。4.25μmol/L的神经酰胺分别刺激融合AECⅡ单层6h和12h后，与未处理对照组比较，TER显著下降、OD470均显著增加。结论1.通过胰蛋白酶消化法分离及差速贴壁法纯化获得的胎鼠AECⅡ生长状态良好，产量及纯度高，可用于体外实验研究。2.神经酰胺可降低AECⅡ的细胞活力，抑制其体外增殖。3.TER联合倒置相差显微镜较单独应用倒置相差显微镜对AECⅡ单层融合状态的判断具有更高的准确性。4.TER及辣根过氧化物酶标记法均能有效检测细胞单层通透性的变化，两者联用可获得更多反映通透性变化的信息。