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子宫内膜炎是发生于子宫内膜浅表的炎症,是奶牛产后常见的一种生殖器官疾病,是导致奶牛不孕的重要原因之一。治疗方法主要有全身性的治疗和针对子宫局部抗感染的治疗。目前由于长期大量不科学使用,使许多药物的治疗效果并不理想,导致奶牛体内菌群失调、产生抗药性。尤其是食物链的药物残留问题已引起世人普遍关注。因此,奶牛业迫切需求防治子宫内膜炎的安全有效、环保无残留的治疗药物,以保障奶牛业的健康发展。本研究应用选择性培养基和细菌生理生化方法从子宫内膜炎患牛子宫分泌物中分离鉴定奶牛子宫内膜炎常见病原菌用于奶牛子宫内膜炎病理模型的建立。从健康奶牛阴道分泌物中分离乳酸杆菌,通过细菌形态、培养特性、体外抑菌活性、生化试验和PCR种属分析进行鉴定。通过对选择的菌种鼠李糖乳杆菌、枯草芽孢杆菌和从阴道分泌物中筛选鉴定的乳酸杆菌进行生物学特性的研究,分析其是否能够用于研制防治奶牛子宫内膜炎的微生态制剂。应用家兔建立奶牛子宫内膜炎病理模型,通过子宫灌注研究复合活菌制剂对子宫内膜炎的防治效果。结果从子宫内膜炎患牛的子宫分泌物中分离到3株金黄色葡萄球菌,1株表皮葡萄球菌,4株大肠杆菌,2株无乳链球菌,3株牛链球菌和2株粪链球菌。经安全性试验检测,分离得到的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和表皮葡萄球菌均具有致病性,但表皮葡萄球菌致病性稍差。从奶牛阴道分泌物中分离到革兰氏阳性,厌氧,无芽孢产酸杆菌15株。经体外抑菌试验筛选出一株抑菌活性相对较强的菌株LB-2,经鉴定该菌为嗜酸乳杆菌。所选菌种嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌及枯草芽孢杆菌对奶牛子宫内膜炎致病菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和无乳链球菌具有较好抑制作用并对奶牛子宫内膜上皮细胞具有一定的黏附性,但相比之下,枯草芽孢杆菌的抑菌活性和黏附性稍差;嗜酸乳杆菌的最佳培养条件为:温度39℃,起始pH6.6,接种量3%,装液量300mL,厌氧静止培养;鼠李糖乳杆菌的最佳培养条件为:温度39℃,起始pH6.4,接种量4%,装液量300mL,厌氧振荡培养;枯草芽孢杆菌的最佳培养条件为:温度37℃,起始pH7.0,接种量4%,装液量50mL,需氧振荡培养。枯草杆菌的耐热性最强,嗜酸乳杆菌和鼠李糖乳杆菌较差。三株菌能够共生于同一环境中,最佳收获时间均为培养后18～20h,无致病性。临床变化和主要脏器指数测定表明所制备的复合活菌制剂是安全的。复合活菌制剂防治奶牛子宫内膜炎的动物试验研究结果表明,该制剂对试验家兔子宫内膜炎治疗效果显著,治愈率75%,好转率100%,并能起到一定的预防作用。同时,应用该制剂能够刺激家兔机体免疫系统,显著提高机体IgG、IgA和IgM的水平。综上所述,应用嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和枯草芽孢杆菌制备的复合活菌制剂能够防治由奶牛子宫内膜炎常见病原菌引起的家兔子宫感染,并能提高家兔抗体水平。可用于下一步临床防治奶牛子宫内膜炎的研究。