人乳头状瘤病毒16E7在人喉癌细胞系中的转染及表达

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[目的] 克隆HPV16E7-HSP70基因,提取该融合蛋白。研究HPV16E7基因对喉癌细胞的影响。[方法] 构建HPV16E7-HSP70基因原核表达质粒,重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)表达,纯化复性目的蛋白;扩增出HPV16E7基因全长序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)中。用电穿孔法将重组体pcDNA3.1/myc-His-HPV16E7转染入喉癌HEp-2细胞中,观察其表达情况。[结果] HPV16E7-HSP70融合基因可以在原核细菌中正确表达。HEp-2细胞能够稳定表达HPV16E7蛋白。流式细胞仪检测转染后细胞增生活跃,S期明显延长。[结论]成功获得HPV16E7-HSP70融合蛋白;成功构建鉴定了载体pcDNA3.1/myc-His-HPV16E7;HPV16E7有促进HEp-2细胞的致瘤活性。
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