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随着经济的快速发展，所引发的环境问题也日益严重，污染治理迫在眉睫。多环芳烃是自然环境中普遍存在的一种芳香族有机污染物，来源广泛且难于消除。由于其对人类健康造成了重大威胁，因而受到了广泛的关注。微生物降解是修复多环芳烃污染的重要手段，因此，从环境中筛选多环芳烃高效降解菌株，研究其降解特性及降解关键酶的基因，并将其应用到切实解决环境问题中去，具有重要的理论价值和现实意义。本文从采用克拉玛依石油污染土壤为样品源，采用芘平板生化法从中筛选得到多株具有多环芳烃降解能力的菌株，经过复筛，选取其中一株在多环芳烃培养基中培养时生长情况最好的B2菌株进行研究。经过菌落菌体形态观察、16S rDNA序列分析，从多相分类的角度并融合细菌分类技术，将B2菌株归类为假单胞菌属。通过单因子影响实验及正交实验对菌株B2的生长条件进行了优化，确定了菌株培养的最佳条件为37℃，pH=7.0，150rpm，芘浓度约在50mg／L左右，装液量为100ml／250ml。实验采用正交设计试验对假单胞菌属B2对芘降解条件进行优化，利用DPS数据处理系统分析所得数据，建立B2对芘的降解力回归方程，推导最优降解条件。Y=16.864-41.214X1+0.564X2+22.355X12-0.003X22-0.048X1X2+7.016X1X3-0.0187X2X3即在菌液OD600为0.60，温度为40℃，pH为6.0的条件下，可以完全降解浓度为38.214mg/L的芘。以上述条件进行实验验证，实际测得最大降解量为37.906mg/L的芘，预测准确率达到99.19%。通过质粒消除、PCR扩增等方法将分离得到的Pseudomonas sp.B2菌中的邻苯二酚-2，3-双加氧酶基因B2C23O定位于细菌染色体上。采用PCR扩增的方法从菌株B2中克隆得到大小约为0.9kb的基因片段。测序结果表明，该基因全长为880bp，具有一个完整开放阅读框的邻苯二酚-2，3-双加氧酶基因（B2C23O）序列，编码246个氨基酸组成的邻苯二酚-2，3-双加氧酶。并与NCBI数据库中已收录的邻苯二酚-2，3-双加氧酶核酸及氨基酸序列进行比对。在已报道的邻苯二酚-2，3-双加氧酶核酸序列中，B2菌的邻苯二酚-2，3-双加氧酶基因与假单胞菌属细菌的该酶基因最相似，其中，与恶臭假单胞菌W619的同源性最高，为97%；与绿脓杆菌PAGI-6和荧光假单胞菌F113的相似性均为96%。利用VectorNTI推导其编码的蛋白序列并对其各项参数进行详尽分析。采用常规方法构建表达载体，利用pET32a（+）载体对C23O基因进行了表达， C23O酶活性检测结果表明，C23O在菌液上清液中未检测到，说明该酶不是胞外酶；该酶在诱导条件下菌体破碎上清中酶活性随诱导时间增长而增大，但是诱导时间7.5-10h过程中酶活性增长相当缓慢。蛋白质电泳结果表明，融合蛋白的分子量大小约为30kDa，与预期结果27.35kDa相近。通过生物学检测结果表明，融合基因得到表达，为进一步将该酶基因转移到野生菌中构建基因工程菌奠定了基础。