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研究背景:原发性干燥综合征(Primary sj(?)gren’s syndrome,pSS)是一种主要累及外分泌腺的慢性炎症性自身免疫性疾病。除了浸润的免疫细胞及细胞因子,细胞外基质(Extracellular matrices,ECMs)及细胞外基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMP)在pSS患者的腺体损害及炎症发生中也发挥着关键作用。在pSS中,已有研究显示MMP-9在pSS血清和组织中高表达,并且和病理损伤程度和疾病发生存在密切关系。然而,MMP-9活化导致的下游致病机制依然不清楚。Decorin作为ECMs一种蛋白聚糖,广泛参与多个生物学过程,同样是Toll样受体(TLRs)的内源性配体。已有研究证实其可作为损伤相关分子模式(Damage associate molecular pattern,DAMP)分子,介导无菌性炎症反应。作为组织中DAMP分子一种,其释放依赖于损伤条件下细胞外基质中蛋白水解酶的剪切。并且,decorin受体TLR2和TLR4在pSS患者唇腺组织中相对于正常人同样表达升高。那么,细胞外基质decorin是否在pSS病理过程中发挥作用及如何作用,有待进一步研究。研究目的:探究细胞外基质decorin在原发性干燥综合征发病中的致病机制及临床意义。研究方法:提取GEO数据库中三种不同组织来源的数据中DCN基因的表达值和相关临床数据。分析DCN基因表达情况,并将DCN基因表达值与临床参数及其他基因进行相关性分析。运用CIBERSORT反卷积算法分析腮腺组织免疫细胞浸润情况。酶联免疫吸附方法(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)测定纳入对象外周血中decorin表达水平,并与pSS患者临床参数进行相关性分析。对获取的唇腺组织,进行苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE)、免疫组织化学和免疫荧光染色。体外培养唾液腺导管肿瘤细胞系A253和THP-1细胞系,外源性给予不同浓度decorin刺激,流式细胞术(Fluorescence activating cell sorter,FACS)测定细胞凋亡情况及运用逆转录聚合酶链反应方法(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测细胞因子表达。研究结果:DCN基因在pSS患者全血转录组中表达明显低于健康对照组;在腮腺组织RNAseq中,DCN基因的表达明显高于健康对照组。全血转录组DCN基因表达值与pSS患者疾病活动度评分无相关性。腮腺组织RNA-seq中,DCN与凋亡基因CASP3表达呈正相关,与增殖基因MKI67表达呈负相关;DCN与炎症因子IL1B表达呈正相关;DCN与TLR2及MYD88表达呈正相关。pSS患者外周血血清decorin表达明显低于健康对照,与其临床参数(包括ESSDAI评分、focus score、Ig A、Ig M及Ig G)等指数无相关性。唇腺组织decorin免疫组化染色显示,与SSICA患者相比,Decorin及其受体TLR4在中度和重度pSS患者唇腺组织中表达明显增多。且免疫荧光共定位染色提示在pSS患者唇腺组织导管周围存在decorin与TLR4共定位,相比于SSCIA组表达上调。腮腺组织RNA-seq数据免疫细胞浸润分析结果显示,pSS患者唾液腺组织中以固有免疫细胞M1型巨噬细胞及γδ-T细胞和适应性免疫细胞T/B细胞亚群为主。同时,pSS患者唇腺组织中M1型巨噬细胞相对于SSCIA患者明显升高。外源性给予decorin刺激,可诱导唾液腺导管上皮细胞凋亡,并呈现浓度和时间依赖性;并且,其可诱导唾液腺导管上皮细胞TNF-α转录表达上调和M1型巨噬细胞相关转录因子表达上调。实验结论:细胞外基质decorin及其基因DCN在pSS患者外周血中表达降低,与疾病活动无相关性,没有发现它可作为反映疾病活动的生物标记。但decorin在pSS患者唇腺组织中表达升高,可作为DAMP分子诱导唾液腺导管上皮凋亡及致炎因子产生。同时,decorin还可以作用于炎性部位巨噬细胞,促使其由M0向M1转化,并分泌相关致炎因子。我们的探索性研究为寻求pSS慢性炎症新的治疗靶点提供了科学实验依据。研究背景:系统性硬化症(Systemic sclerosis,SSc)是一种病因不明的,由免疫介导的系统性慢性炎症性疾病,其发病率和死亡率高。SSc病人主要临床表现为皮肤纤维化(张力增高)、脏器病变(肺、肾、胃肠道等)、血管病变等。在受累器官中,胃肠道(Gastrointestinal tract,GIT)是除皮肤外第二常见的器官,约90%以上的患者累及GIT,表现为吞咽困难、食管反流、呕吐、便秘和腹痛。目前治疗这种疾病的手段和方法非常有限。并且,还没有理想的动物模型能够完全复制SSc的血管病变、纤维化、炎症和自身免疫四种基本病理生理特征,更没有专门设计用于研究胃肠道病变的动物模型。博来霉素(Bleomycin,BLM)诱导的小鼠模型不仅表现出局部皮肤硬化,而且存在全身性免疫反应,如自身抗体产生,是目前较为常用的SSc动物模型。已有研究显示SSc病人肠道菌群出现紊乱,且参与疾病的发生发展。验证博来霉素诱导的小鼠模型能否模拟人SSc肠道菌群变化,可进一步用于研究肠道菌群在SSc中的致病机制。研究目的:探究系统性硬化病人及BLM诱导小鼠模型肠道菌群生物多样性改变。研究方法:通过收集5名SSc患者及10名健康对照粪便样本,及小鼠粪便样本,进行DNA抽提及质检。委托上海美吉生物对样本进行16Sr RNA测序,获得测序数据经校正后在美吉云平台进行菌群多样性分析。研究结果:本研究发现BLM诱导的小鼠模型粪便菌群多样性与SSc病人有着相同改变。Alpha多样性分析显示,BLM诱导的小鼠和SSc病人在物种多样性指数改变趋势上具有一致性。物种组成分析发现,相比于对照组,厚壁菌门(Firmicutes)在BLM诱导的小鼠和SSc病人粪便中明显富集,而拟杆菌门(Bacteroidetes)减少;在属水平上,乳酸杆菌属(Lactobacillus)在BLM诱导的小鼠和SSc病人粪便中都表现在增高。PCo A和Lefse软件分析发现,乳酸杆菌(Lactobacillus_salivarius)在SSc病人粪便中相比于健康对照明显升高,具有统计学意义。在BLM诱导小鼠中也出现相同改变,乳酸杆菌(unclassified_g_Lactobacillus;Lactobacillus_reuteri)也明显增高。实验结论:BLM诱导小鼠模型肠道菌群多样性能够模拟SSc病人菌群多样性改变,为研究肠道菌群在SSc疾病中作用提供了合适的动物模型。