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慢性髓系白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)是一种常见的骨髓恶性增殖性肿瘤,约占成人白血病发病率的15%。CML的遗传学特点是95%患者体内存在Bcr-Abl融合基因,其高酪氨酸激酶活性在CML的发生发展中发挥着重要作用,是当前CML治疗的特异性靶点。酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine Kinase Inhibitors,TKIs)的应用开辟了 CML靶向治疗的新时代。然而随着临床应用的积累,TKIs耐药现象日渐增加。因此,寻找CML的新型抗肿瘤靶点、探索新靶点与TKIs药物联合成为CML分子靶向治疗的研究趋势。表皮生长因子受体通路底物 8(Epidermal growth factor receptor pathway substrate 8,EPS8)是分子量为97kDa的细胞内多种酪氨酸激酶磷酸化底物。多项研究表明,EPS8作为一种肿瘤相关抗原,在多种恶性实体肿瘤中过表达,且其过表达程度在肿瘤的发生发展以及肿瘤细胞侵袭、迁移过程中发挥着重要的作用。近年来,我们发现EPS8在多种恶性血液系统肿瘤中高表达,且EPS8高表达程度与疾病的不良预后相关。然而EPS8在CML发生发展中的作用、其在体内外对CML细胞增殖和侵袭以及药物敏感性的影响目前尚未明确。本研究通过慢病毒转染法沉默或过表达CML细胞中的EPS8基因,探索EPS8在体内外对CML细胞增殖、侵袭等生物学行为以及对伊马替尼药物敏感性的影响及其作用机制。研究共分为三部分,第一部分探讨沉默或过表达EPS8基因在体内外对CML细胞增殖、侵袭等恶性生物学行为的影响。研究通过慢病毒转染法沉默或过表达CML细胞中的EPS8基因,成功构建稳定低表达或过表达EPS8基因的CML细胞株;通过MTT法及台盼蓝拒染法测细胞增殖曲线、甲基纤维素克隆形成实验及Transwell侵袭实验检测沉默或过表达EPS8基因后CML细胞克隆形成能力和侵袭转移能力的变化;并通过动物实验探索EPS8基因在体内对肿瘤生长的影响。结果提示,EPS8基因在体外能够促进CML细胞增殖、克隆形成和侵袭转移能力,并且靶向下调EPS8基因在动物体内能够降低肿瘤成瘤能力、延长CML动物的生存时间。第二部分探讨沉默或过表达EPS8基因后CML细胞在体内外对伊马替尼药物敏感性的变化情况。研究通过MTT法检测沉默或过表达EPS8基因后CML细胞对伊马替尼药物敏感性的变化;通过流式细胞检测凋亡率的方法检测沉默或过表达EPS8基因后伊马替尼诱导的CML细胞凋亡率的改变;并在CML动物造模成功的基础上,分别对沉默EPS8组的动物模型和对照组的动物模型进行相同剂量的伊马替尼治疗,通过比较不同组动物的生存时间探索沉默EPS8基因在动物体内对伊马替尼药物敏感性的影响。结果提示,靶向沉默EPS8基因能够在体内外增强CML细胞对伊马替尼的药物敏感性。第三部分探讨EPS8基因调节CML细胞对伊马替尼药物敏感性的作用机制,探索沉默或过表达EPS8基因后CML细胞自噬水平的变化在其中发挥的作用。通过Western blot法及透射电子显微镜法检测EPS8基因对CML细胞自噬水平的影响;并通过免疫荧光共聚焦和Western blot法检测沉默或过表达EPS8基因后CML细胞对伊马替尼药物敏感性的变化与自噬的关系。结果提示,靶向沉默EPS8基因可能通过下调CML细胞的自噬水平提高CML细胞对伊马替尼药物敏感性。结果进一步证实以EPS8为靶点,联合酪氨酸激酶抑制剂能够一定程度上提高CML的治疗效果。综上所述,本研究探索发现EPS8基因作为一种新型肿瘤相关抗原,在体内外对CML细胞的增殖、侵袭等恶性生物学行为有一定的促进作用,且靶向抑制EPS8基因可能通过下调CML细胞的自噬水平,从而提高CML细胞对伊马替尼药物敏感性。研究结果提示以EPS8为靶点,联合酪氨酸激酶抑制剂能加强CML的治疗效果,为CML治疗的肿瘤相关靶点的药物联合治疗提供新线索。