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背景宫颈癌广泛性根治手术经过100多年的发展,技术逐渐规范化、成熟化,早期宫颈癌患者手术治疗疗效明确,五年生存率可高达80%以上,但术后复发转移仍严重威胁患者的生命。影像学检查多在肿瘤已经出现复发转移,病灶形成后才能表现出,发现时机晚,精准度低,无法进行早期预测。对于经过系统化、规范化治疗后的宫颈癌患者,并没有一种稳定有效的方法来预测术后复发与转移的时机。究其根本原因,我们对宫颈癌发生、发展中的基因表达、分子调控机制尚不完全清楚。因此寻找特异性、敏感性的分子标志物,客观精准评估及监测宫颈癌预后尤为必要。近年研究发现具有特殊结构的环状RNA(circular RNA,circRNA)在结直肠癌、肝癌、食管癌等恶性肿瘤中显著差异表达,有可能成为较为理想的肿瘤分子标志物。截至目前为止,circRNA与宫颈癌的相关研究报道很少,circRNA能否及早精准预测宫颈癌的预后更无从谈起。目的本研究旨在采用基因芯片技术筛选宫颈癌组织中circ RNA差异表达谱,并进行RT-qPCR验证,分析差异性表达circ RNA与宫颈癌常规预后指标的临床意义,为宫颈癌预后的精准预测奠定实验基础。方法1.筛选、验证并分析宫颈癌组织及癌旁组织中circRNA的差异性表达随机选取我院接受宫颈癌广泛性根治手术的10例宫颈癌患者,应用高通量circRNA芯片技术,筛查宫颈癌组织与对应癌旁组织中差异表达谱,并采用RT-qPCR技术验证circRNA的差异性表达。对筛选出的显著差异性表达的circRNA对应的靶基因及相关基因进行基因本体论(Gene Ontology,GO)分析,分析circRNA在宫颈癌中的生物学进程,探索差异表达的circRNAs与宫颈癌发生发展之间的关系,有助于了解宫颈癌详细的致病机制,对宫颈癌的预后、评估疗效提供指导意义。2.分析差异性表达的circRNA与常规预后指标的相关性在上部分研究的基础上,选取RT-qPCR技术验证的具有显著差异表达的circRNA,检测其在其余28例宫颈癌组织中的相对表达水平,采用统计学方法分别分析其相对表达水平与宫颈癌患者HPV感染、肿瘤大小、组织学类型、细胞分化程度、FIGO分期、复发与转移等临床指标的相关性,判断circRNA能否作为评估宫颈癌预后的分子标志物。结果1.宫颈癌及其配对正常组织中circRNA表达有差异表达谱监督性层次聚类分析结果显示差异表达的circRNA能正确区分宫颈癌肿瘤组织与癌旁组织。宫颈癌组织和正常组织之间平均有25,749个circRNA(13,304~41,830)差异性表达(倍数变化≥2),其中表达水平上调达2倍以上的有12,806个(7,366~20,036),差异水平下降达2倍以上的有12,943条(6,467~21,794)。2.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证circRNA表达水平随机选取hsa-circ-0013058、hsa-circ-0026919、hsa-circ-0022812、hsa-circ-0018917、hsa-circ-0079474、hsa-circ-0069272等14个显著差异表达的circRNA,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术验证circRNA表达水平,结果显示78.6%(11/14)与芯片结果一致。3.生物信息学分析利用GO分析对宫颈癌组织中显著差异表达的circRNA与mRNAs、miRNAs之间关系以及其参与的信号通路进行分析,结果显示差异表达的circRNA的相关编码基因及宿基因均主要参与细胞周期、细胞迁移和细胞运动等癌细胞编码过程中,circRNA通过与癌基因相关mRNAs、mi RNAs相互联系,参与宫颈癌的发生发展中。4.宫颈癌组织中显著差异性表达circRNA的表达水平与临床指标的关系选取RT-qPCR技术验证过的表达具有一致性且显著表达差异的hsa-circ-0022812、hsa-circ-009272,分别分析其在组织中的相对表达水平与HPV感染、肿瘤大小、细胞分化程度、组织学类型以及术后复发转移等指标的相关性。结果发现hsa-circ-0022812表达水平与HPV感染、肿瘤大小、细胞分化程度及术后复发转移有关(P<0.05);hsa-circ-009272表达水平与HPV感染、细胞分化程度、组织学类型及术后复发转移有关(P<0.05);这两种在宫颈癌组织中差异性表达的circRNA,其表达水平均与HPV感染、细胞分化程度及术后复发转移有关,提示宫颈癌组织中circRNA相对表达水平可作为评估宫颈癌疗效、判断预后的分子标志物。结论宫颈癌组织与对应癌旁正常组织比较,circRNA表达水平发生显著差异,并通过RT-qPCR验证。GO分析发现差异表达的circRNA参与细胞周期、细胞迁移和细胞运动等癌基因的表达过程中,与靶基因、mRNAs、mi RNA相互作用,从而直接或间接参与宫颈癌的致癌过程。此外,宫颈癌组织中显著差异表达的circRNA,其表达水平与HPV感染、细胞分化程度、术后复发转移等常见临床评价指标有明显相关性,这提示circRNA可能作为评估宫颈癌疗效、判断预后的分子标志物及潜在的治疗靶点。