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目的1、通过相对简单的方法分离纯化人外周血NK细胞,对纯化条件进行优化,并进行培养,建立一种经济高效的NK细胞纯化、培养及鉴定的方法；2、检测NK细胞对不同肿瘤细胞的杀伤活性,为NK细胞的临床应用提供实验基础；3、探讨NK细胞杀瘤活性与肿瘤细胞表面MICA/B表达的相关性,为提高NK细胞的杀伤敏感性提供基础。方法1、人外周血NK细胞的分离纯化及检测补体裂解法、单抗铺皿法、percoll不连续密度梯度离心法、RosetteSep⑧富集法分离人外周血NK细胞,流式细胞术检测NK细胞的纯度,对几种方法进行比较和优化；2、NK细胞杀伤活性的检测采用CCK-8法检测不同效靶比时NK细胞对白血病细胞K562、肾癌细胞769-P、乳腺癌细胞Bcap37、肺癌细胞A549的杀伤活性。3、肿瘤细胞表面MICA/B的表达采用流式细胞术检测人白血病细胞K562、肾癌细胞769-P、乳腺癌细胞Bcap37及肺癌细胞A549表面MICA/B的表达。结果1、NK细胞的分离纯化单抗铺皿法、补体裂解法、percoll不连续密度梯度离心法分离NK细胞的纯度分别为(30.90±2.35)%、(42.59±4.01)%、(60.02±3.25)%,RosetteSep(?)直接法及改进法分离NK细胞的纯度分别为(95.39±3.87)%、(96.52±2.42)%.2、NK细胞对肿瘤细胞的杀伤率NK细胞对同一肿瘤细胞的杀伤活性,在不同效靶比之间,差异有显著性(P<0.01)；在同一效靶比时,NK细胞对K562、Bcap37及769-P的杀伤活性较强,与A549相比有显著性差异(P<0.01),其中K562与Bcap37之间无显著性差异(P>0.05)。3、肿瘤细胞表面MICA/B的表达K562、Bcap37、769-P及A549细胞表面MICA/B的表达阳性率分别是(60.35±0.50)%、(90.72±0.64)%、(55.59±0.55)%、(3.84±0.10)%。4、NK细胞杀瘤活性与MICA／B表达的相关研究在效靶比为5：1、10：1、20：1时,K562、Bcap37、769-P及A549细胞表面MICA/B的表达与NK细胞的杀瘤活性均呈正相关关系(P<0.05)；对同一肿瘤细胞,随着效靶比增加,相关性增强。结论1、对NK细胞的几种纯化方法进行比较,其中RosetteSep(?)改进法可以获得高纯度的NK细胞,是一种经济,快速简便,并且纯化率高的分离方法；2、NK细胞的杀伤敏感性与肿瘤细胞表面MICA/B的表达水平相关,肿瘤细胞表面MICA/B的表达水平影响NK细胞的杀伤活性。