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目的:观察同源盒基因A10(homeobox gene A10,HOXA10)在人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞系NB4细胞中的表达及全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)的干预对其表达的影响,通过mRNA水平和蛋白水平研究HOXA10表达的变化趋势,探讨HOXA10介导白血病发生的机制并为临床应用ATRA治疗白血病提供实验依据。方法:1.采用NB4细胞株作为髓系白血病细胞模型,并用肿瘤细胞体外培养技术进行培养。2.采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法分别检测不同浓度的ATRA在不同干预时间对NB4细胞增殖的影响,进而确定实验最终所采取的药物浓度以及检测的时间点。3.实验分组:取对数生长期细胞106/ml,本课题共设四个组,其中实验组加入终浓度为1.0μmol/L的ARTA干预4h、48h、96h,对照组不加药物干预。4.采用瑞氏染色法鉴定NB4细胞并观察经ATRA诱导后,随着时间的推移NB4细胞发生的形态学变化。5.采用实时荧光定量PCR法(real-time fluorescentquantitative-PCR,FQ-RT-PCR)检测NB4细胞中HOXA10mRNA的表达水平及ATRA干预对其表达的影响。6.采用Western bolt法检测HOXA10蛋白的表达及药物干预后的变化。7.免疫组织化学技术(immunohistochemical technique,IHC)定性定位检测HOXA10蛋白在NB4细胞中的表达部位及药物干预对蛋白表达强弱的影响。8.统计方法:所有数据资料均行方差齐性检验,并用SPSS11.5软件进行统计分析,P<0.05则差异具有统计学意义。结果:1. CCK-8试验结果确定本实验所采取的药物终浓度为1.0μmol/L,检测时间点为ATRA干预细胞后4h、48h和96h。2.瑞氏染色结果表明实验所培养的细胞为幼稚粒细胞,且经1.0μmol/L ATRA诱导后发生形态学上的细胞分化现象,在倒置光学显微镜下观察可见细胞核明显缩小,核可偏向一侧,有分叶状、折叠、凹陷等现象出现,胞浆量增多,核质比变小,核仁减少或消失。3. HOXA10基因在NB4细胞中高表达,且在ATRA干预细胞4h、48h和96h后基因表达呈下降趋势,其中48h和96hHOXA10mRNA表达量较对照组明显降低(P<0.05)。4. NB4细胞中可以检测到HOXA10蛋白的表达,且随着ATRA干预时间的延长,HOXA10蛋白的表达量逐渐降低,其中4h组下降不明显(P>0.05),而48h与96h组HOXA10蛋白表达量有显著地降低(P<0.05)。5. NB4细胞中有HOXA10蛋白的表达主要位于NB4细胞的胞膜和胞浆,并在ATRA干预后蛋白的表达强度逐渐减弱。结论:本实验证明HOXA10基因和蛋白在人急性髓系白血病细胞株NB4的细胞增殖过程中有表达,1.0μmol/LATRA在诱导时间内能促进NB4细胞向成熟方向分化,并能下调NB4细胞中HOXA10mRNA和蛋白的表达,提示全反式维甲酸治疗白血病的机制可能与其调节HOXA10基因和蛋白的表达有关,HOXA10亦可能成为急性髓系白血病基因治疗的一个新靶点。