论文部分内容阅读
肝脏疾病是影响人类身体健康的最主要的疾病之一,然而目前对肝脏损伤暂无治疗效果较明显的药物,肝正修复茶是在河南用于保肝治疗的一种民间组方。本研究的目的是探讨肝正修复茶水煮液、酒浸液的肝损伤保护作用及其可能的作用机制。本课题采用MTT法检测了肝正修复茶水煮液、酒浸液体外对正常小鼠脾淋巴细胞增殖的影响及对H2O2损伤的LO2人肝细胞增殖抑制率的影响;采用扑热息痛(AP)致小鼠急性肝损伤模型、酒精(ETOH)致小鼠急性肝炎模型、地塞米松联合酒精(DXM+ETOH)致小鼠急性脂肪性肝炎模型、刀豆蛋白(ConA)致小鼠急性免疫性肝损伤模型、CCl4致小鼠急性肝损伤及CCl4致小鼠慢性肝损伤(肝纤维化)模型,评价了肝正修复茶水煮液、酒浸液给药后对各种不同因素引起的肝损伤的保护作用;采用DXM+ETOH致小鼠急性脂肪性肝炎模型、CCl4致小鼠急性肝损伤及CCl4致小鼠慢性肝损伤(肝纤维化)模型,检测血清和肝组织中抗氧化酶活性(如过氧化氢酶和超氧化物歧化酶)、TGF-β1和MDA含量,探讨了肝正修复茶肝损伤保护作用的机制。另外,本文测定了肝正修复茶水煮液,酒浸液中总黄酮类化合物的含量及其对DPPH氧自由基的体外清除能力,并与Vc做了比较。体外试验显示:不同浓度的肝正修复茶水煮液与酒浸液对体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞的增殖无明显影响,但对H2O2致LO2人肝细胞的损伤有一定的保护作用,可明显降低H2O2对LO2细胞增殖的抑制率,其中0.125%的肝正修复茶水煮液和酒浸液可分别使H2O2对LO2细胞增殖的抑制率从70%下降到37%、28%。体内实验显示:肝正修复茶水煮液和酒浸液可明显降低扑热息痛致急性肝损伤小鼠的肝脏指数(%)及血清中ALT、AST、TG、TC的水平,升高小鼠血清和肝组织中白蛋白和总蛋白的含量,明显改善扑热息痛引起的小鼠肝索排列紊乱、大片坏死等病理损伤。肝正修复茶水煮液可明显降低ETOH致急性肝损伤小鼠的肝脏指数及血清中ALT、AST的水平,明显改善酒精引起的肝组织细胞排列紊乱和炎性浸润的现象。肝正修复茶水煮液、酒浸液可明显降低DXM+ETOH致急性脂肪肝小鼠的肝脏指数及血清中ALT、AST、TG、TC的水平,升高血清和肝组织中白蛋白和总蛋白的含量,明显改善急性脂肪性肝炎小鼠肝细胞的脂肪性病变。肝正修复茶可明显降低ConA致急性免疫性肝损伤小鼠的肝脏指数及血清中ALT、AST的水平,明显改善ConA引起的肝脏细胞炎性浸润现象。肝正修复茶可明显降低CCl4致急性肝损伤小鼠的肝脏指数及血清中ALT、AST、TG、TC的水平,升高小鼠血清和肝组织中白蛋白和总蛋白的含量,明显改善CCl4引起的急性肝损伤小鼠肝小叶结构紊乱,肝细胞肿胀,片状变性坏死及炎症浸润等病理变化。肝正修复茶可明显降低CCl4致慢性肝纤维化小鼠的肝脏指数及血清中ALT、AST、胶原Ⅰ、胶原Ⅱ、胶原Ⅲ、bFGF、TIMP-1及LN的水平,升高小鼠血清和肝组织中白蛋白和总蛋白的含量,明显改善其肝细胞粗糙肿大及炎性细胞浸润等病理变化(HE染色),并减少肝纤维化小鼠肝组织中纤维素的沉积(Masson染色)。以芦丁为标准品测定肝正修复茶水煮液、酒浸液中的总黄酮,含量分别为1.89mg/ml、3.35mg/ml。体外DPPH自由基清除实验显示,肝正修复茶酒浸液对DPPH自由基的最大清除效能(Emax,86.7%)大于肝正修复茶水煮液(Emax,80.2%)但低于维生素C(Emax,95.1%)。肝正修复茶水煮液和酒浸液均能明显升高CCl4致急性和慢性肝损伤小鼠、DXM+ETOH致急性脂肪性肝炎小鼠血清和肝组织中T-SOD、CAT、GST、GSH-PX、GSH的水平,抑制小鼠肝脏脂质过氧化产物MDA的生成,且能明显降低CCl4致慢性肝纤维化小鼠血清中TGF-β1的水平。综上所述,肝正修复茶水煮液与肝正修复茶酒浸液对正常小鼠免疫功能的影响不明显,对扑热息痛、酒精、ConA、CCl4致小鼠急性肝损伤及CCl4致小鼠慢性肝纤维化、DXM+ETOH致小鼠急性脂肪性肝炎均有一定的保护作用。肝正修复茶水煮液与肝正修复茶酒浸液均含有较高水平的黄酮类成分,有清除自由基、抗氧化作用,其肝功能保护作用可能与增强机体抗氧化防御系统的功能及阻止TGF-β1的信号转导有关,也说明肝正修复茶有明确的多层次的肝损伤保护作用。