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以伊拉兔耳为原料,分别从兔耳软骨中提取硫酸软骨素(CS)、从兔耳皮中提取硫酸皮肤素(DS)。将兔耳褪毛、去肉,剥皮后分别得新鲜兔耳软骨和兔耳皮,经脱脂、加热蒸煮、5%胰蛋白酶37℃下酶解12h、乙醇沉淀回收得到兔耳软骨粗多糖MT1和兔耳皮粗多糖RS,收率分别为15.2%和1.51%。醋酸纤维素薄膜电泳(CAME)结果显示MT1和RS均属于CS类,MT1与CSA标品迁移率最为接近。单糖组成分析结果则表明MT1中含半乳糖胺(GalN)和葡萄糖醛酸(GlcA)较多,且摩尔比约为1∶1;而兔耳皮粗多糖中含IdoA,证明了硫酸皮肤素(DS)的存在。通过QFF阴离子交换树脂对粗品进行分离纯化,MT1分别以0、0.7、0.8和0.9mol/LNaCl溶液洗脱,得到4个组分MT-A、MT-B、MT-C和MT-D,其中MT-C和MT-D收率较高,分别为37.0%和24.5%;RS以0、0.4、0.7、0.8和0.9mol/LNaCl溶液洗脱,得到RS-A、RS-B、RS-C、RS-D和RS-E5个组分,其中RS-C、RS-D和RS-E收率较高。用醋酸纤维素薄膜电泳检测各纯化组分的种类和纯度,MT-C、MT-D电泳条带单一,电泳迁移率与CSA标准品接近;RS-C、RS-D和RS-E的电泳迁移率与CS类标准品接近。用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)与十八角激光散射仪(MALLS)联用在线检测,结果显示MT-C、MT-D和RS-E色谱峰均单一对称,经计算其重均分子量(Mw)分别为23.5kDa、41.1kDa和25.2kDa,MT-C、MT-D的分子量分布宽度比CSA标准品更小,RS-E的的分子量分布宽度比CSB标准品更小。用软骨素酶ABC降解的方法分析二糖组成,薄层色谱(TLC)结果表明,MT-C和MT-D可被完全降解;高效液相色谱(HPLC)数据分析可知MT-C和MT-D的Δdi4S/Δdi6S值分别为2.21和4.58,较CSA标准品(1.38)高,且含少量的Δdi0S和ΔdiSD;对于兔耳皮多糖,TLC结果和HPLC数据则表明,RS-C属于CSC,RS-D属于CSA,RS-E则属于DS,二糖单位以Δdi4S为主,含IdoA的二糖单位与含GlcA的二糖单位的比例约为1∶1,且含少量的ΔdiSB和ΔdiSD。红外光谱(IR)结果进一步说明MT-C、MT-D和RS-E的硫酸根取代大多在C4位上;13C-NMR结果显示MT-1和MT-2这两种CSA杂峰少、纯度高,GalNAc以C-4位硫酸化为主。以上结果表明MT-C和MT-D均是以ΔGlcA-GalNAc4S为主要二糖组成单位,并含有部分ΔGlcA-GalNAc6S和ΔGlcA-GalNAc、少量ΔGlcA2S-GalNAc6S的高纯度CSA;而RS-E是一种二糖单位以ΔUA-GalNAc4S为主、且ΔIdoA-GalNAc4S与ΔGlcA-GalNAc4S的摩尔比约为1∶1、且含部分ΔUA2S-GalNAc4S和少量的ΔUA2S-GalNAc6S与ΔUA-GalNAc的高纯度DS。在结构研究基础上,对兔耳软骨多糖、兔耳皮多糖进行BaF3细胞增殖活性评价,结果发现MT-D、RS-E有一定的促细胞增殖活性,表明其与FGFR1、FGF2有一定的结合能力;以APTT、TT和PT为指标,对软骨多糖、纯化组分磺化样品SMT-C、SMT-D以及兔耳皮多糖的抗凝活性进行评价,结果表明,SMT-C、SMT-D和RS-E有一定的抗凝活性,且主要是通过内源性途径引起的。SMT-C、SMT-D的抗凝活性好于MT-C、MT-D,说明硫酸根是抗凝活性的促进基团。并探讨了兔耳多糖对纤溶系统的影响,其中MT-C与MT-D对u-PA、t-PA和t-PA/PAI-1的提高作用较为显著,具有促血栓溶解的潜力。总之,本研究系统建立了从兔耳中提取分离纯化糖胺聚糖工艺,首次从中获得新型硫酸软骨素和硫酸皮肤素,并对其细微结构进行了表征,填补了兔耳软骨、兔耳皮多糖研究空白,为其工业化生产提供了理论依据。此外,兔耳软骨来源的硫酸软骨素具有较好的促血栓溶解活性,兔耳皮来源的硫酸皮肤素具有较好的抗凝活性,为其开发为理想的抗血栓或抗凝候选药物提供了参考。