根据已报道的STLV-1病毒gag蛋白基因(Genbank登录号：AY590142),人工合成猴STLV-1病毒gag基因,将其克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTB,经PCR、酶切及测序鉴定,成功地构建了猴STLV-1病毒gag基因杆状病毒表达重组质粒pFastHTB-gag。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DHlOBac感受态细胞,经卡那霉素、庆大霉素和四环素平板抗性筛选,PCR鉴定,表明获得了转座的杆粒Bacmid-gag。在此基础上,提取Bacmid-gag杆粒,并转染Sf9昆虫细胞,96h后反复冻融细胞,收集上清液,获得杆状病毒。通过SDS-PAGE和Western blotting分析表明初步获得了表达的gag蛋白大小约为55kD,并且具有良好的免疫学活性。用纯化的gag蛋白作为诊断抗原建立了检测猴STLV-1病毒抗体的间接ELISA方法。Gag抗原最适包被浓度为0.28μg/孔,待检血清最适稀释度为1：100,HRP酶标二抗的最适工作浓度为1：5000,间接ELISA的判定标准为：OD450nm≥0.327时判定为阳性,OD450nm≤0.285时判定为阴性,二者之间为可疑。该检测方法不与猴B病毒、猴D型反转录病毒的阳性血清发生交叉反应。与商品化的ELISA试剂盒检测方法相比,对来自云南省的200份现地猴血清进行检测,检测结果表明ELISA方法的特异性和敏感性都较高,并且两者的符合率达到98.5%,建立的间接ELISA方法为STLV-1病毒抗体检测提供了快速、准确、简便的方法。研究采用重组表达并纯化的gag蛋白作为免疫原,免疫8周龄BALB/c雌性小鼠,经三次免疫后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,用本研究第四章实验建立的间接ELISA方法检测、筛选出阳性杂交瘤细胞克隆,并经有限稀释法克隆化培养获得gag蛋白特异性杂交瘤细胞一株：3B6。杂交瘤细胞株的成功筛选为单克隆抗体的制备和进一步建立检测STLV-1抗体的竞争ELISA检测方法奠定了基础。