随着人们对水产品消费需求的日益增加,水产养殖业迅猛发展,人工高密度养殖成为主要的养殖方式,由于致病菌的感染造成的水产动物死亡给水产养殖业造成了严重的经济损失。同时,一些水产动物病原菌也是重要的人类食源性致病菌,对人类的健康造成严重的威胁。这其中,迟缓爱德华氏菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌就是三种常见的水产类人畜共患致病菌,建立这三种病原体的现场快速检测技术对于控制疾病的爆发和传播具有重要应用价值。本研究以重组酶聚合酶等温扩增技术为基础,分别建立了迟缓爱德华氏菌的单重检测技术和副溶血弧菌、霍乱弧菌的双重检测技术,评估了所建立方法的特异性、灵敏度等项目。本研究主要包括:（1）建立迟缓爱德华氏菌的RPA-LFS检测方法。在迟缓爱德华氏菌基因组上搜索出特异性保守序列,然后设计RPA引物和探针。对建立的RPA-LFS方法经过体系优化、特异性、灵敏度测试和人工污染样本检测。结果表明,该方法在37°C条件下反应20 min即可完成扩增,产物的试纸条测试5 min即可完成。与常见的8种水产类致病菌不发生交叉反应,特异性强。对迟缓爱德华氏菌培养物的最低检出限为单次反应1 CFU,人工污染鲤鱼肝组织样本检测表明,10~1 CFU/g的污染样本在富集4 h后即可检出。（2）建立副溶血弧菌和霍乱弧菌的双重Real-time RPA检测方法。该方法在在前人研究的基础上,参考针对副溶血弧菌gyr B基因和霍乱弧菌lol B基因上已设计报道的RPA引物探针序列,组建双重反应体系。通过对双重体系的特异性、灵敏度、人工污染样本和实际临床样本的检测进行方法评估。结果表明,双重体系对副溶血弧菌的检出限为99 CFU/μL或72 copies/μL,对霍乱弧菌的检出限为37 CFU/μL或30 copies/μL,灵敏度较高。特异性实验表明该方法能特异性地检出副溶血弧菌和霍乱弧菌及其分离株,对其余13种种间病原体检测结果呈阴性。人工污染样本的检测表明,10~0 CFU/10g的副溶血弧菌和霍乱弧菌在富集6 h后即可检出。在临床样本的检测中,其检测结果与q PCR法100%一致。本研究充分利用RPA技术的优势,成功建立了三种水产类人畜共患致病菌的现场快速检测方法。其中,针对迟缓爱德华氏菌建立了单重的RPA-LFS检测方法,该方法特异性强、灵敏度高,检测时间短、对仪器的依赖程度小,可以为无实验条件地区的检测提供技术方案。针对副溶血弧菌和霍乱弧菌建立了双重Real-time RPA检测方法,该多重检测方法可以实现一次反应中同时检测两种致病菌,节约了检测时间和成本,同时提高了诊断效率。该方法经测试表明特异性强、灵敏度较高,检测结果准确可靠,此外该方法可以摆脱对昂贵的反应仪器的依赖,在现场检测中具有广泛的发展前景。该论文有图15幅,表13个,参考文献104篇。