滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae,MS）是引起禽类呼吸道疾病的主要病原体,鸡或火鸡感染MS会引起气囊炎、关节渗出性滑膜炎,发病鸡出现跛行、产蛋减少和体制下降的现象,可垂直传播给后代,给全世界养禽业造成巨大的经济损失。MS感染大多数情况下呈区域性的发病,很少发生大规模的爆发。近几年,由于我国对MS防控相对鸡毒支原体（Mycoplasma galliscepticum,MG）较薄弱,导致MS感染越发严重。NADH氧化酶（NADH oxidase,NOX）是一种氧化还原酶,是维持生物代谢生长的重要酶类。有研究表明NOX不仅具有酶的催化作用,在某些致病菌中还是膜表面黏附相关因子,能协助病原菌黏附宿主细胞,甚至影响毒力。本实验室前期研究表明MS的NOX不仅在胞浆中发挥催化酶的功能,在MS的膜表面也有少量存在,且具有免疫原性,是可能的黏附相关蛋白。本研究用本实验室前期构建好的重组菌株E.coli BL21（p ET28a-MSNOX）,通过IPTG诱导表达后,聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析重组MSNOX（recombinant MSNOX,r MSNOX）蛋白于上清和沉淀中均表达,用His-Tag磁珠纯化上清中的r MSNOX蛋白,得到较为纯净的r MSNOX蛋白。用纯化后的r MSNOX蛋白与弗氏佐剂同体积混合乳化,对BALB/c小鼠进行免疫,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠效价,将效价最高小鼠的脾细胞与鼠源骨髓瘤细胞融合。通过间接ELISA和有限稀释法对融合的杂交瘤细胞进行筛选,直至筛选出能够稳定分泌抗r MSNOX蛋白抗体的杂交瘤细胞株。采用间接ELISA和免疫印迹法（Western blot）对单克隆抗体进行特异性的检测,将获得的杂交瘤细胞连续传代10次和反复冻融,测试杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性。本研究成功制备了一株能够稳定分泌抗r MSNOX蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为2F4,经间接ELISA、Western blot、悬浮免疫荧光结果显示,该单克隆抗体均可与滑液囊支原体发生特异性反应,并且与其他禽类致病菌不发生反应。通过单克隆抗体亚型分析试剂盒,鉴定该单克隆抗体为Ig G2b亚类,κ链;通过连续传代,反复冻融,仍然具有稳定分泌抗体的能力,表明该单克隆抗体具有很好的稳定性;通过秋水仙素法对杂交瘤细胞株进行染色体分析,该株杂交瘤细胞2F4有98±5条染色体,符合杂交瘤细胞染色体的数目;将杂交瘤细胞经腹腔注射至6-8周龄BALB/c小鼠中制备腹水,经间接ELISA检测腹水效价达到1:2048000。综上所述,本研究成功表达和纯化了r MSNOX蛋白,且成功制备了1株能够稳定分泌抗r MSNOX蛋白抗体的杂交瘤细胞株,为建立滑液囊支原体的检测方法及进一步研究MSNOX在MS致病机制中的作用奠定了基础。