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第一部分:Srx和β-catenin在宫颈癌组织中的表达及与恶性程度的相关性研究 目的:探讨硫氧还蛋白(Sulfiredoxin;Srx)和β-联蛋白(β-catenin)在宫颈癌组织中的表达及临床意义。 方法:免疫组织化学法检测正常宫颈上皮、宫颈上皮内瘤变(CIN)以及宫颈癌组织中Srx与β-catenin的表达;分析与宫颈癌临床病理指标的关系;探讨Srx与β-catenin表达的相关性。 结果:Srx与β-catenin的表达在CIN组织、宫颈癌中均显著高于正常宫颈组织;并且Srx与β-catenin表达呈正相关。Srx的表达与淋巴结转移、脉管浸润、浸润深度有关;β-catenin 的表达与肿瘤转移、组织分级、FIGO分期密切相关。 结论:Srx和β-catenin在宫颈癌中高表达;且与恶性程度相关。 第二部分:慢病毒沉默和过表达Srx对宫颈癌细胞侵袭和迁移的影响 目的:观察慢病毒沉默和过表达 Srx 基因后;宫颈癌细胞侵袭和迁移能力的变化。 方法:通过Transwell 小室实验分别检测慢病毒沉默Srx基因后宫颈癌细胞HeLa 和SiHa的侵袭迁移变化情况;及慢病毒过表达Srx基因后宫颈癌细胞C33A的侵袭迁移变化情况。 结果:Transwell 小室实验结果表明:同对照组相比;沉默Srx的宫颈癌细胞HeLa 、SiHa的侵袭和迁移能力明显降低;过表达Srx的宫颈癌细胞C33A的侵袭和迁移能力明显增高(P<0.05)。 结论:Srx可促进宫颈癌细胞的侵袭迁移。 第三部分:Srx调控宫颈癌侵袭和迁移的机制的研究 目的:观察 Srx基因沉默和过表达后; Wnt/β-catenin 通路相关分子表达的变化; 探讨 Srx参与宫颈癌进展的作用机制。 方法:1.Western blottiong 方法检测沉默和过表达Srx基因后;宫颈癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin以及通路中其他重要相关分子p-β-catenin; Gsk/3β;p- Gsk/3β和通路下游粘附相关靶基因 CD44 的蛋白表达水平;QRT-PCR 在基因水平上检测靶基因CD44 mRNA表达水平。 2. XAV-939 ( Wnt/β-catenin 信号通路抑制剂 )对宫颈癌细胞HeLa 、SiHa以及过表达Srx基因后的宫颈癌细胞C33A的侵袭迁移的影响。慢病毒过表达Srx后的C33A以及HeLa 、SiHa三株细胞分别分为3个组:⑴ DMSO溶剂对照组 ⑵ 空白对照组 ⑶ XAV-939抑制剂组。实验通过Transwell 小室实验分别检测各组宫颈癌细胞的侵袭和迁移水平。 3. Western blottiong 方法检测XAV-939对宫颈癌细胞HeLa 、SiHa以及过表达Srx后的C33A内源性Srx蛋白的影响。 结果:1.Western blottiong实验结果表明: 慢病毒过表达Srx后;宫颈癌细胞C33A中的β-catenin;p- Gsk/3β;CD44蛋白表达水平明显升高;p-β-catenin;Gsk/3β蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。慢病毒沉默Srx后;宫颈癌细胞HeLa 、SiHa中的β-catenin;p-Gsk/3β; CD44 蛋白表达水平明显降低;p-β-catenin;Gsk/3β蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。QRT-PCR 实验结果显示:在 HeLa 、SiHa 细胞株中;CD44 的mRNA表达量在干扰组中较对照组明显下降(P<0.05);在C33A细胞株中;CD44的mRNA表达量在干扰组中较对照组明显升高(P<0.05)。 2. Transwell 小室实验结果显示:在HeLa 、SiHa以及过表达Srx后的 C33A 三株细胞中;抑制剂组相对照组的侵袭迁移能力均明显减弱(P<0.05)。 3. XAV-939作用于三种细胞(HeLa 、SiHa以及过表达Srx 后的C33A)后;三株细胞的Srx 蛋白表达量均明显降低(P<0.05)。 结论:Srx 可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与调控宫颈癌细胞侵袭和迁移。