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叶黄素是一种非常重要的类胡萝卜素,具有抗氧化,预防癌症和着色等功能。小球藻胞内富含叶黄素,且具有结构简单、生长繁殖迅速、培养成本低且易于大规模培养等优点。因此,运用小球藻合成生产叶黄素具有广泛的应用前景及潜在的经济效益。本研究以普通小球藻(Chlorella vulgaris)为材料,首先优化了普通小球藻原生质体制备方法,获得了高产率的原生质体。然后以小球藻原生质体为受体,gus基因作为报告基因,优化了电击转化条件,建立了小球藻电击转化体系。在此基础上,将IPP异构酶基因(idi)电击转入小球藻中,获得了转基因藻株。具体研究内容和结果如下:(1)采用酶解法获得普通小球藻原生质体,并研究了预处理时间、酶的种类、酶解温度、酶解pH、酶解时间和酶解转速对普通小球藻原生质体制备的影响。结果表明,EDTA和DTT预处理使普通小球藻原生质体形成率提高了5.43-17.68倍;用2%纤维素酶、2%果胶酶和2%蜗牛酶混合酶,在30℃、pH5.8、120rpm条件下,酶解14h可得到最高的原生质体形成率,即49.17%。(2)以普通小球藻原生质体为受体,以gus基因作为报告基因,建立了普通小球藻电击转化体系。结果表明:在电转电压1800V、运载DNA浓度125μg/mL、质粒DNA 8μg/mL条件下可获得较高的转化率;电击缓冲液中加入Ca2+可大大提高小球藻转化率;电击前后对原生质体细胞和质粒DNA混合液冰浴处理会导致转化效率越低。(3)以普通小球藻18S rDNA基因片段为同源臂,nptII基因为抗性筛选基因,构建了含有大肠杆菌来源IPP异构酶基因(idi)的重组载体pBS-18S1-nptII-idi-18S2。在优化的电击转化条件下,将重组载体电击转化普通小球藻,成功获得IPP异构酶基因的转化子。结果表明:转化子的生物量和野生型普通小球藻接近,说明idi基因转化小球藻并不会对其生长有明显影响。另外,叶黄素含量比野生型提高了38.27%,叶黄素的产量比野生型提高了42.16%。