本研究采用RAPD和ISSR两种DNA分子标记方法，以离体保存3年的‘金水’、‘金花’和离体保存5年的‘身不知’为试验材料，其中离体保存时间分别为26、30和34个月的‘金水’标记为A₂₆、A₃₀和A₃₄，‘金花’标记相同，为B₂₆、B₃₀和B₃₄，离体保存时间分别为52、56和60个月的‘身不知’标为C₅₂、C₅₆和C₆₀，以其田间植株A₀、B₀和C₀为对照。在对两种标记方法的反应体系进行优化的基础上，采用最佳反应体系研究了不同保存时间的离体材料的遗传差异。其主要结果表明： 1．适合梨RAPD扩增的最佳反应体系为20μL反应体系中含模板DNA30ng，1×buffer，Mg²⁺2.0mmol·L^₁，引物0.5gmol·L^-1，dNTPs0.20mmol·L^-1，TaqDNA聚合酶1U。反应程序为：94℃预变性5min；94℃1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，40个循环；72℃继续延伸10min，4℃保温。用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物。 2．适合梨ISSR扩增的最佳反应体系为20μL反应体系中含模板DNA30ng，1×buffer，Mg²⁺2.0mmol·L^-1，引物为0.4gmol·L^-1，dNTPs0.20mmol·L^-1，TaqDNA聚合酶1U。反应程序为：94℃预变性3min；94℃1min，52℃（或50℃、55℃）退火1min，72℃延伸2min，40个循环；72℃继续延伸10min，4℃保温。用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物。 3．RAPD和ISSR分析所得A组、B组和C组材料的多态性条带百分率（PPB）分别为1.48％、1.29％、2.65％和2.78％、2.60％、3.42％，离体保存34个月的A组和B组的PPB均低于离体保存60个月的C组的PPB，材料离体保存时间越久，其出现多态性条带的百分率越高。RAPD和ISSR分析三组材料所得组内遗传距离分别为A₀A₃₄（0.075），B₀B₃₄（0.054），C₀C₆₀（0.107）和A₀A₃₄（0.111），B₀B₃₄（0.083），C₀C₆₀（0.177），离体保存34个月的A组和B组内田间材料和离体材料的遗传距离均低于离体培养60个月的C组内田间材料和离体材料的遗传距离，材料保存时间越长、继代次数越多，与田间材料的遗传距离就越大。 离体保存26个月的‘金水’材料A₂₆与对照之间的遗传距离A₀A₂₆大于A组内保存相隔时间仅为4个月的材料间距离A₂₆A₃₀和A₃₀A₃₄，与之相同，B₀B₂₆大于B₂₆8₃₀和B₃₀8₃₄，C₀C₅₂大于C₅₂C₅₆和C₅₆C₆₀。对于培养间隔时间都同为4个月的材料间的遗传距离，又以A₃₀A₃₄大于A₂₆A₃₀，B₃₀B₃₄大于B₂₆B₃₀，C₅₆C₆₀大于C₅₂C₅₆。材料保存相隔时间越长，其间的遗传距离越大。