化石能源的过度开采和资源匮乏,导致一系列难以恢复甚至永久性的环境问题。为实现可持续发展,向生态文明迈进,世界能源的格局,必须从化石能源向清洁能源转换。利用生物转化将木质纤维素转化为生物乙醇,不仅大大弥补化石燃料的匮乏,还可以明显降低大气污染,成为国内外研究的重点课题。丝状真菌Podospora anserina（P.anserina）含有较多的与木质纤维素降解相关的蛋白,其中包括氧化还原酶类。为探究氧化还原酶NADH脱氢酶（NADH dehydrogenase,ndh）对丝状真菌P.anserina利用木质纤维素的影响机制和其他生理过程的调控,我们通过SplitMarker方法,对三个NADH脱氢酶基因（Pa-1-22770,Pa-2-7140,Pa-2-13790）Pandh1、Pandh2和Pandh3进行定点敲除,并通过抗性筛选、PCR验证和Southern Blot验证得到阳性转化子,成功获得单突变菌株△Pandh1、△Pandh2和△Pandh3,并通过遗传杂交的方法构建多重突变体△Pandh1△Pandh2、△Pandh1△Pandh3、△Pandh2△Pandh3和△Pandh1△Pandh2△Pandh3,同时构建回补菌株△Pandh3-cpm。我们对各菌株进行生长表型、碳源替代、次生代谢产物等方面的比较分析,并测定他们对木质纤维素材料的降解能力。实验结果可知:（1）△Pandh3与野生型菌株相比,在生命过程中没有子实体的形成。（2）△Pandh3菌落生长明显延迟,在第三天和第五天分别菌落直径减小到野生型的81.8%和88.2%,且菌丝出现明显的色素沉着现象;同时,△Pandh3的生命周期得到明显延长,为野生型的2.3倍。（3）各突变体在不同碳源的培养基上生长速率均有所降低,特别是在木质素中,三重突变菌株△Pandh1△Pandh2△Pandh3的菌落直径仅为野生型的79%,在微晶纤维素碳源上,菌落的生长同样受到了抑制。（4）DAB染色实验显示,△Pandh3菌体染色程度明显降低。（5）HPLC分析发现,与野生型相比,△Pandh3突变体中ATP含量略有减少,AMP含量显著增加,表明△Pandh3突变体中AMP/ATP比值明显升高。（6）通过酶活力测定显示,各突变体的NADH脱氢酶酶活和滤纸酶活均大大降低,其中△Pandh2△Pandh3菌株的NADH脱氢酶酶活下降最为显著,仅为野生型的50%;而△Pandh1△Pandh3的滤纸酶活相当于野生型的53.5%。由上述数据结果,我们可以得出以下结论:（1）NADH脱氢酶在丝状真菌利用木质纤维素的过程中,起着重要作用。（2）NADH脱氢酶通过影响线粒体呼吸链的最终产能,参与到丝状真菌子实体的形成过程中,是菌体生长发育的关键调节因子。