论文部分内容阅读
目的:探讨中药制剂苦参碱(Matrine)对人肝癌细胞HepG2的增殖抑制效应和对辐射敏感性的影响;研究X射线照射联合中药制剂苦参碱对HepG2细胞人宫颈癌基因HCCR-1 (Human Cervical Cancer Oncogene-1)及其相关基因表达的影响。方法:1、于体外培育人肝癌细胞HepG2,光镜下观察细胞的生长状态,取处于生长对数期的细胞试验。2、以培养基稀释的不同浓度苦参碱处理人肝癌细胞HepG2,其终浓度0.2mg/ml、0.4 mg/ml、0.8 mg/ml、1.6mg/ml、3.2mg/ml。3、MTT法研究苦参碱对HepG2细胞增殖的抑制效应。4、应用克隆形成法检测,探讨中药制剂苦参碱对HepG2细胞辐射敏感性的效应。5、应用Hoechst33258荧光染色法检测HepG2细胞凋亡的形态学变化。6、应用蛋白质印迹法(Western blot)检测苦参碱作用24h后,HCCR-1及其相关蛋白表达水平。结果:1、MTT法结果表明,苦参碱的浓度越高,其对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制效应越明显,该抑制效应呈现一定时间-剂量依赖关系。0.2 mg/ml苦参碱对HepG2细胞的增殖抑制率<30%。2、克隆形成实验表明,苦参碱处理HepG2细胞4h后再予X射线辐照,联合组比单独辐照组存活率明显降低(P<0.01)。结果表明苦参碱对于HepG2细胞有显著辐射增敏效应。3、Hoechst33258荧光染色结果表明,在X射线处理后24h联合组比单独辐照组表现出更为明显的细胞凋亡形态学变化。4、蛋白质印迹法检测结果表明,在辐照后24h,联合组同辐照组相比,HCCR-1蛋白表达量降低,p53和Bax蛋白的表达水平增高(P<0.05)。结论:1、苦参碱能够明显抑制体外培育的肝癌HepG2细胞的增殖效应,增强对于HepG2细胞辐射敏感性。2、苦参碱能降低肝癌HepG2细胞的原癌基因HCCR-1蛋白表达水平,增加其相关基因p53、Bax蛋白表达水平。3、苦参碱对HepG2细胞有增殖抑制效应。其机制可能与降低HCCR-1基因表达,增加其相关基因p53、Bax表达水平,而抑制HepG2细胞增殖,促进细胞凋亡有关。