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研究背景与目的乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)严重威胁人类健康。全球大约有3.5-4.0亿慢性HBV毒携带者。尽管乙型肝炎疫苗的问世,每年仍有5000万例新感染乙型肝炎患者。绝大部分成年的HBV感染者具有自限能力,有5%至10%患者可发展为慢性感染。同时有15%至40%慢性乙型肝炎患者在其一生疾病的进展中将会发生严重的并发症。慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)感染的自然病史是一个动态过程,根据宿主免疫反应状态的不同可将CHB的自然史分为四个阶段：免疫耐受(Immune tolerant, IT)期,免疫清除(Immune clearance,IC)期,低复制(Low or no-repliicative, LR)期,再活动期；再活动期也被称为HBeAg阴性的慢性乙型肝炎(HBeAg Negative Hepatitis, ENH)。关于乙型肝炎慢性化的具体机制仍不清楚,有效的T细胞应答对病毒的清除起到重要作用,异常免疫应答不利于病毒清除。白细胞介素(Interleukin, IL)-10是一种免疫和炎症抑制因子,可参与Th2型细胞免疫反应。有研究表明IL-10的表达上调与T细胞反应应答抑制有关,并可以导致HBV感染的慢性化。本研究通过检测CHB患者外周血单个核细胞及血浆中IL-10及其相关细胞因子IL-6和肿瘤坏死因子(tumornecrosis factor, TNF)-α的表达水平,进而探讨IL-10在慢性乙型肝炎免疫分期进展中的作用及临床意义。研究方法采用回顾性方法共纳入CHB患者197例,其中免疫耐受期40例、免疫清除期97例、低复制期26例和再活动期34例,选择18例健康志愿者为正常对照。酶联免疫吸附法(Enzyme-linked ImmunosorbentAssay, ELISA)检测每位研究对象血浆IL-10、IL-6和TNF-α水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-timePolymerase Chain Reaction, RT-PCR)方法检测每位研究对象外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)和IL-10、IL-6和TNF-α的mRNA水平。采用SPSS22.0进行统计学分析,非正态分布的连续型数据资料以中位数和四分位间距(M[P25,P75])表示；Kmskal-Wallis H检验和Mann-WhitneyU检验用于组间比较。Spearman秩和相关分析用于相关分析。P<0.05时被认为差异具有统计学意义。结果1.CHB患者血浆和PBMCs中IL-10水平较正常对照组明显上调(P<0.05)。我们根据HBeAg和HBVDNA阳性与否分组,分析血浆IL-I0水平和PBMCs IL-10 mRNA水平的表达。HBeAg阳性组患者血浆IL-10水平明显高于HBeAg阴性组(Z=2.591,P=0.01)。而HBVDNA阳性和HBVDNA阴性的CHB患者PBMCs中IL-10 mRNA水平和血浆IL-10水平无明显统计学差异(Z=-1.915,P= 0.099; Z=-1.648,P=0.055)。2.CHB患者血浆和PBMCs中IL-10相关细胞因子IL-6、TNF-α表达水平均也显著高于正常对照组(P<0.05)。CHB患者PBMCs中IL-10 mRNA与IL-6 mRNA水平呈明显正相关(r=0.344,P<0.01),和TNF-α mRNA呈明显负相关(r=0.298, P<0.01)。CHB患者血浆IL-10水平与IL-6蛋白水平呈明显正相关(r=0.514,P<O.01),和血浆TNF-α蛋白呈明显负相关(r=-0.363,P<0.01)。3.CHB患者IL-10 mRNA及蛋白浓度水平与血清ALT呈明显正相关(r=0.392,P<0.01；r=0.264,P<0.01),与血清AST水平呈明显正相关(r=0.290,P<0.01；r=0.184,P=0.01)。4.IL-10蛋白浓度及mRNA水平在不同免疫分期组中有明显统计学意义(P<0.001)。在蛋白水平,免疫清除期患者血浆IL-10水平明显高于免疫耐受期(P<0.05)和低复制期(P<0.05)。在基因水平,免疫清除期PBMCs中IL-10mRNA明显高于免疫耐受期(P<0.001)和低复制期(P<0.05),再活动期PBMCsIL-lOmRNA明显高于免疫耐受期(P=0.01)。Kruskal-Wallis H检验分析IL-6及TNF-α在各免疫分期中没有明显差异。结论免疫清除期患者血浆IL-10水平和PBMCs中IL-10 mRNA水平明显高于免疫耐受期和低复制期患者,再活动期患者PBMCsIL-10 mRNA水平明显高于免疫耐受期。IL-10的表达水平和肝脏的炎症程度密切相关。综上所述,IL-10在慢性乙型肝炎的免疫病程中具有重要作用。