Apigenin (Api)抑制NO、iNOS产生和软骨细胞凋亡的在体研究

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目的 研究Api在体水平能否抑制NO、iNOS产生及软骨细胞凋亡,成为治疗OA的药物成分。 方法 动物随机分组(1)假手术组(2)手术组(3)手术加注药组,每组8只。(1)假手术组:在无菌条件下,切开兔右膝皮肤,直接缝合。2周后,膝内注射二甲基亚砜(DMSO),每只0.1ml,每周一次,每周二次腹腔内注射0.1mlDMSO,连续四周。(2)手术组:在无菌条件下,切断兔右膝前交叉韧带和髌韧带。2周后,每只右膝内注射0.1mlDMSO,每周一次,每周二次腹腔内注射0.1mlDMSO,连续四周。(3)手术加注药组:在无菌条件下,切断兔右膝前交叉韧带和髌韧带。2周后关节内注射Api和0.1mlDMSO混合液,每周一次,每周2次腹腔注射Api和0.1mlDMSO混合液,Api按每公斤体重15mg给予。术前抽取每只兔耳缘静脉血2ml,离心取上清液,封存,超低温保存备测,处死前再次抽血,封存备测。术后6周,处死动物,切开右膝关节,肉眼观察各组动物关节软骨及滑膜情况,切取关节软骨及滑膜标本,标记。右膝关节软骨分成三部分:一部分做组织学观察,HE染色、甲苯胺蓝染色;一部分行电镜观察;另一部分行流式细胞术检测。取血清上清液37℃水浴溶解后,按NO和iNOS试剂盒操作步骤,测定OD值,计算含量。 结果 血清NO值术后6周手术组与假手术组有极显著性差异,p<0.01;注药组与假手术组有极显著性差异,p<0.01;手术组与注药组有显著性差异,p<0.05。血清iNOS值术后6周手术组与假手术组有极显著性差异,p<0.01;注药组与假手术组组有极显著性差异,p<0.01;手术组与注药组有极显著性差异,p<0.01。手术组与假手术组软骨细胞凋亡率有极显著性差异,p<0.01;手术注药组与假手术组有极显著性差异,p<0.01;手术组与注药组有极显著性差异,p<0.01。肉眼观察:手术组病变软骨无光泽,呈淡黄色,表面粗糙,局部菲薄,偶可见教裂及溃疡形成,手术注药组改变较轻。光镜观察:(1) HE染色:手术组可见坏死区域软骨细胞消失,残存细胞核红染,软骨基质纤维变,着色不均,细胞增殖活跃,存在簇集现象,可见裂隙形成深达钙化区,手术注药组改变较轻。(2)甲苯胺蓝染色:坏死区及纤维变区不染,残存软骨细胞和簇集软骨细胞核蓝染,细胞浆呈紫红色或深蓝色。滑膜:手术组滑膜局部充血、增厚,软骨严重退变的滑膜表面形成绒毛状结构,滑膜下层出现纤维素变性,手术注药组改变较轻。电镜观察:手术组可见细胞变形,胞质内充满脂滴,细胞核变形,细胞周晕消失。结论 本研究证明在体水平Api抑制NO、iNOS产生及软骨细胞凋亡,有可能成为治疗OA的药物成分。
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