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生物体内存在着低丰度的翻译后修饰蛋白和多肽(如糖基化蛋白/肽、磷酸化蛋白/肽等),对调节生理各项活动起着十分关键的作用。但是高丰度蛋白质的存在严重干扰对翻译后修饰蛋白和多肽的分析,因此,发展针对低丰度目标蛋白和多肽的样品分离富集方法是提高其分析灵敏度和位点鉴定覆盖率的关键。 采用回流沉淀法,成功制备两性亲水聚合物(聚[2-(甲基丙烯酰基氧基)乙基]二甲基-(3-磺酸丙基)氢氧化铵)修饰的磁性纳米颗粒。此种方法步骤简单,材料表层亲水聚合物的厚度高达60 nm,完美保留了磁性纳米基质的快速磁分离能力。将其用于糖基化蛋白组学中糖肽的分离富集,富集检测限低至0.1 fmol,富集容量为100 mg g-1,富集回收率高于73.6%。在用于实际样品鼠肝蛋白酶解液的分离富集时,共检测到458个糖蛋白的905个N-糖基化位点。 采用层层自组装技术,制备表面包覆金属有机框架的磁性纳米颗粒。该材料比表面积高达168.66 cm2 g-1,孔径为两种独特的介孔尺寸(分别为1.93 nm和3.91 nm)。层层自组装的方法操作简单,使得材料表面的金属有机框架化合物厚度可控。基于Fe3+与磷酸肽之间的螯合作用,将其用于生物样品中磷酸化肽的分离富集,显示出对磷酸化肽的高选择性(β-casein/BSA摩尔比,1∶500),且富集检测限低至0.5 fmol,富集容量为60 mgg-1,富集回收率高于84.5%。此外,该材料利用两种孔径可成功排阻复杂样品中的高丰度蛋白质。在用于人血清内源性磷酸化蛋白组学分析时,成功排阻了大分子蛋白,从5μL样品中共鉴定出4条磷酸化肽;脱脂牛奶酶解液中共鉴定到16条磷酸化肽的特征峰。 将无模板法制备的介孔酚醛型亲水聚合物用于生物样品中糖肽的分离富集,测得富集检测限为10 fmol,回收率高于80.4%。在实际样品人血清酶解液的分析中,共鉴定到92个糖蛋白的169条糖肽。